连香树体细胞胚胎发生及植株再生体系的研究.docx

连香树体细胞胚胎发生及植株再生体系的研究连香树 (Crediphyllumjaponicum Sieb.) 是连香树科连香树属的稀有种植物,是国家二级重点保护植物, 集药用、材用和观赏等功能于一体, 具有广阔的利用前景。然而 , 其雌雄异株 , 结实率低 , 种子较小 , 天然更新能力较差 , 现存树种资源十分稀少 , 常规的繁育方法 , 难以实现其种群的扩繁、 保护和合理利用 , 因此 , 本研究以连香树授粉 120d 的种子为外植体 , 研究不同种类和浓度的植物生长调节剂、不同的外植体类型、不同的添加物等多种因素对连香树体细胞胚胎发生的影响, 以期建立稳定的连香树体细胞胚胎发生的培养体系；同时, 通过对连香树胚性与非胚性愈伤组织同工酶酶谱的分析, 初步探讨连香树体细胞胚胎发生形态建成的机理 , 研究结果如下： 1、以连香树授粉 120 d 后未成熟种子子叶胚为外植体接种到不同植物生长调节剂组合的培养基上诱导愈伤组织 , 在添加不同浓度的 2,4-D 和KT的 MS培养基上 , 愈伤诱导率最高达到73.33%,但在后期的增殖培养中愈伤组织不能转化成为胚性愈伤组织； 在添加不同浓度的6-BA.NAA和 KT 的 MS培养基上 ,愈伤组织也未能在后期培养中转化成为胚性愈伤组织；培养基MS + 0.5 mg/L2,4-D + 2.0 mg/L 6-BA + 0.5 g/LAC是诱导愈伤组织的最佳培养基, 并且在此培养基中能观察到有直接体胚发生的现象, 在后期的增殖培养基MS + 0.1 mg/L2,4-D + 0.1 mg/L 6-BA + 0.5 g/LAC中愈伤组织能转化成为胚性愈伤组织。2、以连香树授粉 120 d 后未成熟种子子叶胚和授粉150 d 后成熟种子萌发出来的幼苗 , 切取子叶面积大小为0.3 cm2、胚轴长度为 0.5 cm和胚根长度为0.5cm作为 4 种外植体诱导愈伤组织, 结果表明未成熟种子子叶胚是诱导体细胞胚胎发生最适合的外植体。 3、连香树体细胞胚胎发生最适合的诱导培养基为MS+ 0.5mg/L 6-BA + 1.0 mg/L NAA + 1.0 g/LAC,体胚的诱导率为 30%；体胚增殖最适合的的培养基为 MS + 0.1 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA + 0.5 g/LAC,PH为 6.0,琼脂浓度为 0.7%-0.75%；体胚苗最适合的生根培养基为MS + 1.0 mg/L IBA 。4、用非变形聚丙烯酰氨凝胶电泳技术(PAGE)对连香树胚性和非胚性愈伤组织的过氧化物酶 (POD)、超氧化物歧化酶 (SOD)和淀粉酶 (AMY)同工酶酶谱的分析表明： POD、SOD和 AMY酶等同工酶活性与胚性愈伤组织的诱导密切相关, 酶谱的差异可作为体细胞胚胎发生的参考标记。