核酸检测 核酸检测在血液筛查中的应用【业界研究】.ppt
《核酸检测 核酸检测在血液筛查中的应用【业界研究】.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《核酸检测 核酸检测在血液筛查中的应用【业界研究】.ppt(36页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、核酸检测在血液筛查中的应用,深圳市血液中心,1,技术研究,血液筛查是否需要进行核酸检测,2,技术研究,无偿献血的新动态,“定期无偿献血者是低危的献血者”,但是“以体检为目的定期无偿献血者是高危献血者”而且这部分人群的献血队伍正在扩大。这部分人群窗口期的机率高于其他人群。因为在他们中间高危的传播行为经常发生。 经过治疗后的HBsAg转阴,ELISA方法检测阴性的献血者。,3,技术研究,NAT与ELISA互补,病毒变异 免疫静默期 实验操作失误 病毒感染的窗口期,4,技术研究,病毒检测窗口期,5,技术研究,血筛用NAT试剂与临床用的不同,6,技术研究,目的和要求不同,定性与定量 临床使用核酸检测主
2、要目的是定量监测,进行疗效分析。 血筛用于病原体的定性筛查 灵敏度和特异性 临床在漏检与误差之间更重视误差 血液筛查用核酸目的是保证用血安全,更重视漏检 质控要求不同 临床用与血液筛查用质控要求也不同。临床试剂以定量准确和防止误报为质控目标 血筛用以防止漏检为主要目的 阳性率也不同 临床更多的阳性;血筛更多是阴性 对自动化要求不同 临床更多用于病人,单人份检测,标本量少 血筛更多用于正常人,因此检测量不同,对自动化的要求也不同,7,技术研究,血筛用NAT平台的要求,灵敏度 HBV10IU/ml;HCV、HIV200IU/ml 特异性 核酸的特异性高,几乎没有方法学假阳性 但要防止污染 内标(内
3、对照) 为避免假阴性,要求每管阳性质控 自动化 大规模、高通量,8,技术研究,关于灵敏度的几个问题,厂家宣传的灵敏度均指单人份检测,而非推荐pooling方案的实测灵敏度 实际应用灵敏度=宣传灵敏度pooling数 IU才有可比性:WHO标准品以及国家一级标准品均以IU为单位 HCV、HIV窗口期浓度高,因此对灵敏度要求较低。 美国FDA要求,HCV、HIV5000IU/ml能在pooling方案中被检出 HBV的窗口期标本在30-300IU/ml之间,因此对灵敏度要求高 低于灵敏度也有检出的可能,这与取样几率有关,9,技术研究,血液筛查常用的NAT技术,10,技术研究,核酸提取均使用磁珠法,
4、磁珠提取的原理: 将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸,并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来 步骤: 裂解吸附洗涤洗涤洗涤洗脱 优点: 磁珠提取特异性高,受标本因素影响小,灵敏度高 易于实现自动化 缺点: 成本较高、并需要一定的仪器(半自动、全自动)。完全手工工作量太大,11,技术研究,实时荧光定量PCR技术原理,所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经
5、过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图 。,12,技术研究,实时荧光优点,特异性好 引物、探针双重保证特异性 方法学假阳性很少 扩增检测同时进行,速度快,且不对扩增产物进行处理,不易污染 荧光检测灵敏度高 罗氏第二代的NAT试剂也是使用实时荧光检测,13,技术研究,内标设计原理,内标为一已知低含量的与模板扩增效率相似的一段DNA片段,将它加入PCR反应液中,与模板共同扩增,以反应每管真实的扩增情况,如果内标和样品都未扩增出结果,则表示该管扩增无效,应重新做。,14,技术研究,内标的作用:避免假阴性,内标的种类: 同源、异源
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 业界研究 核酸检测 核酸检测在血液筛查中的应用【业界研究】 核酸 检测 血液 中的 应用 业界 研究
链接地址:https://www.31doc.com/p-10013600.html