碱性磷酸酶km值测定课件.ppt
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1、碱性磷酸酶km值测定,1,酶促反应动力学研究方法介绍,EXPERIMENT 3,碱性磷酸酶km值测定,碱性磷酸酶km值测定,2,实验目的 学习环境因素对酶促反应速度的影响; 学习米氏方程及Km值得测定; 测量碱性磷酸酶km值; 实验原理 E的反应速度受到环境因素的影响,这些因素包 括底物浓度、E浓度、PH、温度、激活剂、抑止剂等,碱性磷酸酶km值测定,3,(一)米曼氏方程式,中间产物,酶促反应模式中间产物学说,相关E学原理,碱性磷酸酶km值测定,4,1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式,即米曼氏方程式( Michaelis equation)。,S:
2、底物浓度 V: 不同S时的反应速度 Vmax:最大反应速度(maximum velocity) m:米氏常数(Michaelis constant),碱性磷酸酶km值测定,5,米曼氏方程式推导基于两个假设: (1) E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应,而ES分解为E及P的反应为慢反应,反应速度取决于慢反应即 Vk3ES。 (2) S的总浓度远远大于E的总浓度,因此在反应的初始阶段,S的浓度可认为不变即SSt。,碱性磷酸酶km值测定,6,推导过程,稳态:是指ES的生成速度与分解速度相等,即 ES恒定。 K1 (EtES) SK2 ES + K3 ES,则(2)变为: (EtES) S Km
3、 ES,碱性磷酸酶km值测定,7,当底物浓度很高,将酶的活性中心全部饱和时,即EtES,反应达最大速度 VmaxK3ESK3Et (5),将(5)代入(4)得米氏方程式:,碱性磷酸酶km值测定,8,当反应速度为最大反应速度一半时,Km值的推导,KmS,Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度,单位是mol/L。,碱性磷酸酶km值测定,9,(二)Km与Vmax的意义,Km值 Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 意义: a) Km是酶的特征性常数之一; b) Km可近似表示酶对底物的亲和力; c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值。,碱性磷酸酶km值测定,10,Vma
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