临床生化检验方法学评价试验.ppt
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1、1,贵阳医学院医学检验系黄海,实验 27 临床生化检验方法学评价试验,2,实验目的,掌握:方法学评价试验的原理和基本方法及统计分析 熟悉:方法学评价试验的具体操作。,3,一、重复性实验,二、回收试验,三、干扰试验,四、方法比较试验,五、方法性能决定图绘制,六、最低检测限实验,4,实验原理,批内重复性试验是指在同一条件下(用同样的方法,同一种试剂和标准品,同一台仪器,在同一实验室由同一人操作,并保持实验期间准确度不变)对同一标本在尽可能短的时间内进行m轮,每轮n次重复测定,以获得批内精密度数据的试验方法。其结果能反映测定方法的随机误差大小。,一、重复性实验,5,试剂与器材,1. 标本 采用血糖浓
2、度约为6.7mmol/L的血清 标本(收集无溶血、无脂浊、无肝炎病毒 污染的人混合血清或动物血清)。 2. GOD-POD试剂盒。,6,操作步骤,将血清标本用GOD-POD法作5轮,每轮4次血糖测定,即可获得20个测定数据。,7,计算,1. 检验20次测定数据中的离群值 如存在异常值时应剔除。对小样本测定来讲,可采用Grubbs检验,该方法是最合理的检验方法。,8,计算,用Grubbs检验准则,检验离群值的统计学公式是:,式中,Xd为离群值; X为包括离群值在内的测定值的均数;s为包括离群值在内的测定值的标准差,9,如计算的G值大于系数表中相应显著水平的a和测定次数n时的临界值Ga.n,则将X
3、d作为异常值舍弃,可按下列三种情况来处理: (1)只有一个离群值的情况:设有n个测定数(X1X2X3X4Xn)其中X1为离群值,即可利用上述公式,直接对X1进行检验。,计算,10,(2)如果离群值是两个或两个以上,但都分布在均数X的同一侧,例如X1、X2都是离群值,则首先检验最内侧的一个数据(X2),即通过检验G2来决定X2是否应该放弃。如果X2应该放弃,X1自然也应该放弃。如果X2不应舍去,则再检验X1。但在检验X1时测定次数不应作为少了一次。,计算,11,(3)如果离群值有两个或两个以上。而且又分布于均数两侧,例如X1和Xn都属于离群值,则分别检验X1和Xn,是否应该舍去。如果一个数据决定
4、舍去,那么再检验另一个数据时,测定次数应该作为减少一次来处理;而且此时应该选择99%的置信水平。,计算,12,2. 按照批内精密度的计算公式计算5轮每轮4次测定值的平均数(X)、标准差(s)和变异系数(CV%)。,(1),(2),式中为5 轮各次测定值的方差,即:公式,13,首先计算出每轮测定值的均数、标准差(Si)及方差S1、S2、S3、S4,并将数值填入表27-1内,再将5轮Si总和代入公式即可算出批内标准差Sw。最后计算出变异系数(CV%),表27-1 批内重复性试验的数据处理,14,注意事项,血糖的医学决定水平值为2.8 mmol/L、6.7 mmol/L和8.9mmol/L。分析物浓
5、度应选择医学决定水平才更具价值。 2. 用于评价方法精密度的变异系数应该是剔除离群值后的计算结果。,15,评价,批内不精密度的判断限是1/4允许误差范围。 批间不精密度的判断限是1/3允许误差范围。 允许误差范围可以根据CLIA88规定的能力比对试验的TEa确定。,返回本实验目录,16,实验原理,二、回收试验,回收试验是用以发现分析方法比例系统误差的有效评价方法。 即通过测定GOD-POD法测定血糖的回收率,能较确切地判断该分析方法比例系统误差的有无或大小,从而评价方法的准确性。,17,试剂与器材,80mmol/L葡萄糖标准液 生理盐水 3. GOD-POD试剂盒 4. 血清标本 收集无肝炎病
6、毒、无溶血、无脂浊的人混合血清,先用GOD-POD法测定血糖浓度,再用生理盐水稀释血糖浓度至2.2mmol/L备用。,18,操作步骤,1.样品制备 基础样品:血清0.9ml+0.1ml生理盐水。 回收样品:血清0.9ml+0.01ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.09ml生理盐水。 回收样品:血清0.9ml+0.06ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.04ml生理盐水。 回收样品:血清0.9ml+0.09ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.01ml生理盐水。 2.血糖浓度测定 按GOD-POD法测定各制备样品的血糖浓度,每份样品作双份检测,结果取平均值,19,计算,1. 加入浓度
7、计算 2. 回收量计算 2. 回收率计算 将各项计算结果填入表27-2。,20,表27-2 回收试验的数据处理,21,注意事项,1. 标本加入标准液后,总浓度应在该方法的分析 范围内。最好使被测标本的浓度达到医学决定水 平,血糖测定的医学决定水平为2.8 mmol/L、6.7 mmol/L、8.9mmol/L。 2. 纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样品的 10%,若稀释过大,误差将发生改变。 3. 准确加量是本试验最主要的技术关键。,22,评价,一般检验方法,要求回收率在95105%之间,最理想的回收率应为100%,返回本实验目录,23,三、干扰试验,实验原理,干扰试验是测定特异性和干扰两
8、者引起的误差。干扰物浓度一定时,产生的误差是恒定系统误差,误差的实际大小随干扰物的浓度而异。,24,三、干扰试验,实验原理,选用尿酸作GOD-POD法测定血糖的干扰试验,尿酸可疑和GOD反应生成的H2O2发生反应,使部分H2O2不能参与第二步POD的耦联反应,从而降低显色强度,产生负的测定误差。 尿酸对该反应有干扰,但不是尿酸被测定。 干扰试验既用于检测某方法的特异性,也用于检测干扰物质对方法的干扰作用,以评价分析方法的准确性。,25,试剂与器材,1. 血清标本 收集血糖浓度为6.7mmol/L的混合血清(要求同回收试验)。 2. 9.0mmol/L尿酸标准液。 3. GOD-POD试剂盒。,
9、26,操作步骤,1. 样品制备 基础样品:血清0.9ml+蒸馏水0.1ml 干扰样品:血清0.9ml+9.0mmol/L尿酸标准液 0.05ml+蒸馏水0.05ml 干扰样品:血清0.9ml+9.0mmol/L尿酸标准液0.1ml 尿酸样品:蒸馏水0.9ml+9.0mmol/L尿酸标准液0.1ml 2.GOD-POD法测定各样品血糖。,27,计算,1.干扰物加入值计算 2.干扰值计算 3.干扰率计算,28,将各项计算结果填入表27-3内,表27-3 干扰试验的数据处理,29,注意事项,1. 可疑干扰物浓度 加入可疑干扰物的浓度应明显高于通常所见浓度的上限,最好达到病理标本的最高值,尿酸升高的变
10、动范围在0.42mmol/L0.9mmol/L之间。 2. 干扰物对测定的影响与被分析物浓度无关,而与干扰物本身的浓度有关,所以产生的误差是恒定系统误差。 3. 其他注意事项与回收试验相同。,30,评价,偏差Bias允许误差(EA)的临界值,表明由于干扰物引起的偏差对临床诊断和治疗不产生不良影响,是可以被接受的。 血2.8mmol/、6.7 mmol/和8.9mmol/L时的EA为0.56mmol/L。,返回本实验目录,31,四、方法比较试验,实验原理,用两种方法同时检测一批样本,计算出两种方法间测定结果的差异,用以估计试验方法在检测样本时可能引入的误差。当选择准确度已知的常规方法作为比较方法
11、时,部分误差来自比较方法,其他部分误差则来自试验方法。若选择准确度高的参考方法作为比较方法,可把方法间的任何分析误差都归于试验方法。 本实验以HK法测定血糖的参考方法作对比来评价GOD-POD法测定血糖的总系统误差。,32,试剂与器材,1. GOD-POD法试剂盒 2. HK法试剂试剂盒 3. 血清标本40份 (其浓度尽可能覆盖线性范围)。,33,操作步骤,1. 取40份血清标本,每份标本用GOD-POD和HK两种方法,分别作双份测定。 2. 每次(天)测定8个标本,双份测定时第一次按顺序1,2.7,8,第二8,7.2,1,共测试5次(天)。并计算两法各自的测定结果。,34,计算,1. 将实验
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- 临床 生化 检验 法学 评价 试验
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