肝胆病医院碱性磷酸酶ALP测定速率法.doc
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1、肝胆病医院 碱性磷酸酶( ALP )测定(速率法)1:概述碱性磷酸酶英文简称 AKP 或 ALP ,是广泛分布于人体各脏 器器官中,其中以肝脏为最多其次为肾脏,骨骼、肠、和胎 盘等组织 ,。它不是单一的酶,而是一组同功酶。目前已发现 有 AKP1 、 AKP2 、 AKP3 、 AKP4 、 AKP5 与 AKP6 六 种同功酶。 碱性磷酸酶 (ALP ):是从牛肠粘膜或大肠杆菌中 提取。 从大肠杆菌提取的 AP 分子量为 80kD ,酶作用的最适 pH 为 8.0;用小牛肠黏膜提取的 AP 分子量为 l00kD ,最适 pH为96 般采用对硝基苯磷酸酯(p-NPP)作为底物。它 可制成片状试
2、剂,使用方便。产物为黄色的对硝基酚,在 405nm 有吸收峰。用 NaOH 终止酶反应后,黄色可稳定一段 时间。 2 标本的收集新鲜无溶血标本, 血清或血浆样本均不溶血。 血浆样本只 能采用肝素或 EDTA 抗凝。样本在 4摄氏度可稳定 7 天。采 血前病人应禁食 12 小时,采集静脉 3ml, 待凝固后(最好放 在 37 摄氏度水浴箱内 45 分钟)通常为加抗凝剂的血液在30-60 分钟凝血析出血清。 3000r/min 离心 5-10 分钟, 分离出 血清备用。不建议采用血浆标本。3:方法原理 样本中的碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚,生成游离的 对硝基苯酚和磷酸,引起 405nm 处的光
3、吸收值升高,通 过检测 405nm 处光吸收值上升的速率,可以测定碱性磷酸 酶的活力。4 剂来源,配置及储存试剂来源:迪瑞 试剂配置:试剂一和试剂二均为液体试剂,可直接使 用。启用后在 2-8 度可稳定 30 天。 若试剂混浊, 或以蒸馏水 为空白在 405nm 处的光吸收值低于 0.8A, 应予丢弃。试剂储存:试剂避光储存 2-8 摄氏度可稳定至标签所示失效期。5 分析仪器CS-600B 全自动生化分析仪分析参数:样品量 4 u/l 试剂量:第一试剂 200 u/l (R1); 第二试剂 50 u/l测光点 2338 测定模式:速率法 正反应分析波长:405nm/505nm(主波长/副波长)
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