维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较.docx
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1、维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法如荧光法、2, 6-二氯靛酚滴定法、2, 4-二硝基苯肌法、光度分析法、化学发光法、电化学分 析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果.为了解国内VC含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势.方法以维生素C 或抗坏血酸和测定为检索词对19942002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中 的理工A、B和医药卫生专辑进行篇名检索,对所得有关维生素C含量测定的文 献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析. 结果核心期刊载刊文献占文献总量的 45.06 %,其
2、中光度法占65.69 %,电化法占 18.63 %,色谱法占12.75 %;复杂被测样品文献占文献总量的 45.06 %,其中光度 法占60.92 %,色谱法占19.54%,电化法占10.34 %.结论目前国内维生素C含量 测定仍以光度法为主流,但近年来色谱法,特别是HPLC法上升趋势尤为明显.一.荧光法1 .原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺(OPDA)反应生成具有荧光的唾喔咻(quinoxaline ),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度 在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。-可编辑修改-脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA
3、反应,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为 0.022 g/ml。2 .适用范围本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3 .注意事项3.1 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶, 因此,抗坏血酸的测 定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生 Co3.2 某些果胶含量高的样品不易过滤,可采用抽滤的方法,也可先离心,再取上 清液过滤。3.3 活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸,但它也有吸附抗坏血酸的作用, 故活性炭用量应适当与准确,所以,应用天平称量。我们的实验结果证明,用 2g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型,
4、具吸附影响不明 显。二、2, 6-二氯靛酚滴定法(还原型 VC)-可编辑修改-1、原理:还原型抗坏血酸还原染料2, 6-二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原 2, 6-二氯靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准2, 6-二氯靛酚的量与样品中 所含维生素C的量成正比。本法用于测定还原型抗坏血酸,总抗坏血酸的量常 用2, 4-二硝基苯肌法和荧光分光光度法测定。2、注意事项所有试剂的配制最好都用重蒸储水; 滴定时,可同时吸二个样品。一个滴定,另一个作为观察颜色变化的参考; 样品进入实验室后,应浸泡在已知量的 2%草酸液中,以防氧
5、化,损失维生 素C;贮存过久的罐头食品,可能含有大量的低铁离子( Fe2+),要用8%的醋酸 代替2%草酸。这时如用草酸,低铁离子可以还原 2, 6-二氯靛酚,使测定数字 增高,使用醋酸可以避免这种情况的发生;-可编辑修改- 整个操作过程中要迅速,避免还原型抗坏血酸被氧化;(6)在处理各种样品时,如遇有泡沫产生,可加入数滴辛醇消除; 测定样液时,需做空白对照,样液滴定体积扣除空白体积。3优点:它具有简便、快速、比较准确等优点,适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量,易受其他还原物质的干扰。如果样品中含有色素类物质,将给滴定终点的观察造成困难。
6、在 酸性环境中,抗坏血酸(还原型)能将染料2,6 DCIP还原成无色的还原型2,6 一DCIP,而抗坏血酸则被氧化成脱氢抗坏血酸。氧化型 2,6 DCIP在中性或碱 性溶液中呈蓝色,但在酸性溶液中则呈粉红色。因此,当用 2,6DICP滴定含 有抗坏血酸的酸性溶液时,在抗坏血酸未被全部氧化前,滴下的2,6DCIP立即被还原成无色,一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时,则滴下微量过剩的2,6-DCIP便立即使溶液显示淡粉红色或微红色,此时即为滴定终点,表示溶液中的抗坏血酸刚刚全部被氧化。依据滴定时 2,6DCIP标准溶液的消耗量(ml), 可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量。氧化型2,6DCIP与还原
7、型抗坏血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中进行反应。即先将样品溶于一定浓度的酸性溶液中或 经抽提后,再用2,6 DCIP标准溶液滴定至终点。食物和生物材料中常含有其他还原物质,其中有些还原物质可使2,6DCIP还原脱色。为了消除这些还原物质对定量测定的干扰,可用抗坏血酸氧化酶处理,-可编辑修改-破坏样品中还原型抗坏血酸后,再用2,6-DCIP滴定样品中其他还原物质。然后从滴定未经酶处理样品时 2,6-DCIP标准溶液的总消耗量中,减去滴定非抗 坏血酸还原物质2,6 DCIP标准溶液的消耗量,即为滴定抗坏血酸实际所消耗 的2,6 DCIP标准溶液的体积,由此可以计算出样品中抗坏血酸的含量。另外, 还可利
8、用抗坏血酸和其他还原物质与 2,6DCIP反应速度的差别,并通过控制 样品溶液在pH1 3范围内,进行快速滴定,可以消除或减少其他还原物质 的作用,一般在这样的条件下,干扰物质与2,6-DCIP的反应是很慢的或受到抑制。生物体液(如血液、尿等)中的抗坏血酸的测定比较困难,因为这些样品 中抗坏血酸的含量很低,并且存在许多还原物质的干扰,同时还必须预先进行脱 蛋白处理。在生物体液中含有琉其、亚硫酸盐及硫代硫酸盐等物质,它们都能与 DCIP反应,但反应速度比抗坏血酸慢得多。样品中琉基物质对定量测定的干扰, 通常可以藉加入对一氯汞苯甲酸(简称PCMB)而得到消除。三、2, 4-二硝基苯肌法1 .原理总
9、抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性 炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2, 4-二硝基苯肥作用生成红色豚,月杀的含量与总 抗坏血酸含量成正比,进行比色测定。2 .适用范围-可编辑修改-本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。这是胀比色法,单独评价是因为目前它作为 Vc测定的国标法之一,是一种全量 测定法,它跟以前的苯肌法原理相近。首先将样品中的还原型V氧化为脱氢型V, 然后与2, 4一二硝基苯肥作用,生成红色的月杀,将月杀溶于硫酸后进行比色。最 近国标中该法强调空白,每个样品及标准系列均需作对应空白,这样消除色泽、 背景不一的误差。在实际杨梅汁 Vc测定中,
10、操作时间长,操作要求较严格,试 剂较多,就一般实验室而言是目前可以采用的方法。四碘量法1、维生素C的原理维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种。当用碘滴定维生素 C时, 所滴定的碘被维生素C还原为碘离子。随着滴定过程中维生素 C全被氧化,所 滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子可以使含指示剂(淀粉)的溶液产生蓝色, 即为滴定终点。2、注意事项(1)看到红棕色出现时要放慢滴定的速度。-可编辑修改-(2)以显蓝色在30s内不褪色为滴定终点五L-抗坏血酸(维生素C)测定试剂盒(酶学方法)1 .应用于食品,饮料及生物制品检测2 .比色方法此方法用于检测水果和蔬菜(如马铃薯),水果和蔬菜产品(如西红
11、柿酱、泡菜、 果酱、果汁),婴儿食品,啤酒,饮料,流食,粉状和烘烤剂,肉产品,奶制品, 葡萄酒,还有动物饲料,医药品(如维生素配制、阵痛药、退烧药)和生物样品 中的L-抗坏血酸(维生素C),3 .分析物L-抗坏血酸不定量的分布于动物和植物中。人类不能自身生产L-抗坏血酸,因此必须由外源(vitamin C)提供。一般情况下来源于水果和蔬菜中,出于技术原 因,L-抗坏血酸曾被用于食品工业中的抗氧化剂。它是一种相对敏感的物质,L-抗坏血酸的检测非常适用于从原始水果和蔬菜中加工食品的质量评定。L-抗坏血酸用于医药品生产中的组成部分,如维生素产品和阵痛药,另外,它还-可编辑修改-用于动物饲料添加剂中4
12、 .原理L-抗坏血酸 (x-H2)+ MTT+ PMS dehydroascorbate (x) +MTT-formazan + H+XL-抗坏血酸 + ? O2 AAO dehydroascorbate + H2OX5 .特异性在给定的条件下,此方法特别针对于 L-抗坏血酸。合成的D-阿拉伯抗坏血酸/阿拉伯糖型抗坏血酸能作为抗氧化剂,也能反应,但反应速度较慢。6 .灵敏度测定灵敏度为0.005个吸光度单位,样品体积为1.600ml ,此相当于0.1mg/l样品溶液中的L-抗坏血酸浓度。0.015个吸光度单位的差异能造成0.3 mg/l检测限,样品最大体积为1.600 ml.。7 .线性-可编
13、辑修改-测定的线性范围为0.5 ugL-抗坏血酸(0.3mgL-抗坏血酸/I样品溶液体积为 1.600ml )至ij 20 ugL-抗坏血酸(0.2gL-抗坏血酸/I样品溶液体积为0.100ml )8 .精密度在用一个样品做重复实验时,可能会产生0.005-0.010个吸光度单位的差异。标 准的相对偏差(变异系数)大约为1-3%。当分析检测数据时,要考虑到L-抗坏 血酸的水溶液稳定性较差,尤其是重金属离子或氧存在时。9 .干扰及错误来源粮食的成分不经常干扰实验。高浓度的酒精和D-山梨酸醇能降低反应速度,大量的亚硫酸盐必须通过添加甲醛来去除。醋酸抑制酶AAO 0金属和 亚硫酸盐离子可以导致L-抗
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