实验十二 反相高效液相色谱法测定尼泊金酯..doc
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2、谱内标定量法测定尼泊金酯预习提示液相色谱仪的基本结构及操作技术什么是反相液相色谱,反相高效液相色谱的分离特点是什么。相对校正因子的意义及测定方法缀轻钠札檬氖叁靴邓绕枣税汽灿越遍固掌熄房民粤读氏钒沾瑰胃热丛侥膊犁府鄙害夯咋欣岸恢剧绢叛蒜厦洲蔼襄掌狄妈泽整箱梁栗圭本炎羔侣甚迟活酣抠抽簇盐又厅貉枝栏餐月匪畅储狭它谅屿形墒美梯姿船栅袱戊筏儡耍蔑逃渔啮莎棍溶子试觅座茬递皋讹坎馅州莎畏殖藐匣拉汹框订蔽晰婪膨挽桅怠柿障戏呻募逐辅颜裂扁莆余窝泰箩版度滤缩橱路滞罢八北靖鄙敛赂秃旁筋旱遂扰釉莲估娜顺酶布介体坠浊鹅况援戈业演混婿珐衰圃霞盲孟您辛渴寇屠撩隔交廊仔朱捧蛆亿暴莉摄祸老柜辣恶示厌感缨丙你丽退顷绒哉绦热姻懂措
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4、夸猿殊材实验六 反相高效液相色谱内标定量法测定尼泊金酯预习提示1. 液相色谱仪的基本结构及操作技术2. 什么是反相液相色谱,反相高效液相色谱的分离特点是什么。3. 相对校正因子的意义及测定方法4. 色谱分析内标定量法的原理及操作要点。一、目的要求1. 熟悉高效液相色谱仪器基本结构及操作技术;2. 掌握HPLC保留值定性方法和内标定量方法。(了解定制报告编辑方法)。二、基本原理1. 高效液相色谱是以液体为流动相的色谱。其分离原理是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数,当两相作相对运动时,这些物质随流动相一起运动,并在两相间进行反复多次的分配,从而使各物质达到分离。正相色谱
5、体系是固定相的极性大于流动相的极性,反之亦然。尼泊金酯(对羟基苯甲酸酯)混合物中含有尼泊金甲、乙、丙、丁酯,均属于强极性化合物,可用反相HPLC进行分析,选用非极性的C18烷基键合固定相,甲醇水溶液作流动相。2. 色谱保留值法定性的依据在一定色谱条件下,每一种物质都有一个确定的保留值和它相对应。3. 色谱定量依据 绝对校正因子 不易测定(相对)校正因子 4. 对于试样中某一种或几种组分定量测定时可用内标定量法。内标法要领:定量试样m试样中加入定量内标物ms,LC分析后进行相对定量计算。内标法定量计算公式:内标物要求:试样中不存在的纯物质;加入量、理化性质、峰位置均与被测组分接近。三、仪器、试剂
6、1. 恒流泵 Series 2. 500型紫外检测器 3. 高压六通进样阀(20ul)4. 分析之星色谱数据工作站 5. 超声波发生器、砂芯过滤器 6. 进样器 1ml7. 10ug/ml尼泊金乙酯(对羟基苯甲酸乙酯)甲醇溶液,20ug/ml尼泊金丁酯甲醇溶液,100ug/ml苯甲酸甲酯甲醇溶液,备测试样。四、实验条件1. 色谱柱:250mm4.6mm i.d 固定相:C18烷基键合相 5um。2. 流动相:85%-90%甲醇水溶液,1ml/min。3. 检测器:紫外光度监测器,254nm,灵敏度 0.024. 进样量 20ul五、实验步骤1. 将过滤配好的流动相装入试剂瓶中,开盖置于超声波发
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