伤寒杆菌感染模型微生物学与免疫学检验系列实验-PPT文档.ppt
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1、伤寒杆菌感染模型的 微生物学与免疫学检验系列实验,设计目的与意义,伤寒的微生物学与免疫学检验有典型及示范意义,微生物学检验与免疫学检验并存 不同的病程采取采集不同标本 血液标本 绝对无菌的标本 粪便标本含正常菌群的标本,系列实验内容及其安排,系列实验内容及其安排,因病程不同采取不同标本,伤寒的微生物学和免疫学检验,微生物学检验 免疫学检验,伤寒的微生物学血液标本,血液标本微生物学检验的基本原则,血液是无菌标本:采集、运送、接种等全过程严格执行无菌操作 增菌培养、纯培养的培养基:不能使用选择/抑制性培养基, 而用营养培养基 培养鉴定出任何细菌都要报告(排除污染菌) 菌血症是严重的临床症状,要及时
2、与临床沟通、随时报告检验进展 (特别是药物敏感试验的初步报告),血液标本的检验程序,需氧培养,传统方法或自动血液培养仪指示有菌生长,血液标本(无菌采集),厌氧培养,增菌 培养,伤寒的微生物学粪便标本,粪便标本微生物学检验的基本原则,粪便是含正常菌群的标本:注意接种标本的选取 分离培养、增菌培养的培养基:使用强选择/抑制性培养基 粪便标本微生物学检验的核心:可疑菌落的选择,粪便标本,SS琼脂平板培养基,粪便标本的检验程序,粪便标本的检验程序,SS琼脂平板:,成分及其原理,基础性成分:牛肉膏、蛋白胨、琼脂 抑制性成分:硫代硫酸钠、硫代硫酸钠、煌绿、胆盐等 抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群生长 鉴别性成分
3、:乳糖分解产酸;蛋白胨产生硫化氢 指示性成分:中性红酸碱指示剂产酸变红 枸橼酸铁指示硫化氢FeS黑色沉淀 胆盐胆酸混浊菌落,粪便标本的检验程序,SS琼脂平板:,结果判断,SS平板分离培养,SS平板纯培养,大肠杆菌:较大的红色、浑浊的菌落 伤寒杆菌:较小的半透明的淡黄色或无色菌落,部分菌落中心有黑色沉淀,粪便标本的检验程序,KIA琼脂斜面双糖铁培养基:,成分及其原理,基础性成分:牛肉膏、蛋白胨、琼脂 鉴别性成分:葡萄糖(1g/L)分解产酸;乳糖(10g/L)分解产酸 蛋白胨产生硫化氢 指示性成分:酚红酸碱指示剂产酸变黄 枸橼酸铁指示硫化氢FeS黑色沉淀,原理分析:用于观察细菌对糖的利用和硫化氢(
4、变黑)的产生。该培养基含有乳糖和葡萄糖的比例为10:1,只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色。,粪便标本的检验程序,SS琼脂平板:,结果观察与判断,斜面变黄分解乳糖产酸 底层变黄分解葡萄糖产酸 底层有气泡分解葡萄糖产气 底层变黑产硫化氢 A/A+ +,K/A- -,A/A+ -,K/A+ +,K/A+ -,K/A+ +,上此实验结果分析,实验内容: l 感染模型建立: 方法:经口灌胃0.2 mL的5109CFU/L伤寒杆
5、菌菌液。,实验结果: l 共接种了27只小鼠 当场死亡6只 饲养过程中又死亡9只,原因分析: 拿取固定小鼠方法不当、导致当场死亡 灌胃方法不当、导致当场死亡或继后死亡 伤寒杆菌感染导致死亡,上此实验结果分析,应对办法:,同学们大多是首次进行实验,老师已估计到会出现意外情况 同学们现存12只感染小鼠采集第1周粪便/血液用于微生物学检验 老师同时准备了6只感染小鼠采集第1周血清用于肥达血清学试验 老师另外准备了12只正常小鼠同学们练习血液标本的采集 血清用于肥达血清学试验正常血清对照,本此实验内容及其安排,粪便标本的采集及接种微生物学检验 刺激小鼠肛门、促使其排便3粒以上于无菌平皿 无菌摄取3粒粪
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