深圳大学MTT比色法测定细胞生长曲线细胞生长曲线拟合及细胞群体倍增时间的简化计算-精选文档.ppt
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1、1.MTT比色法测定细胞生长曲线,细胞生长曲线,细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。,一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮然后贴壁,随后度过长短不同的迟缓期(潜伏期),即进入大量分裂的对数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入稳定期,然后退化衰亡。 以存活细胞数(万/mL)对培养时间(h或d)作图,即得生长曲线。 一般而言,我们主要研究的是对数生长期的生长曲线。,测定细胞生长曲线的方法,1.细胞计数法(简单、最常用、有误差) (1)传代后把细胞重悬,得到细胞悬液,把悬液均匀加到24孔板中 (2)24 h后开始进行细胞计数
2、,以后每隔24 h计数一次,每次取4孔细胞,分别进行计数,计数结果取4孔的平均值。连续计数6天。 (3)根据细胞计数结果,以单位细胞数(细胞数/mL)为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线。 24孔板 细胞计数板,2.MTT法(复杂,误差小),原理 MTT:全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide 汉语化学名: 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐 商品名:噻唑蓝,是一种黄颜色的染料。 活细胞的线粒体中琥珀酸脱氢酶能够使外源性的MTT还原,同时在细胞色素C 的作用下,生成不溶于水的蓝色(或蓝
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