课题2__多聚酶链式反应扩增DNA片段.ppt
《课题2__多聚酶链式反应扩增DNA片段.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《课题2__多聚酶链式反应扩增DNA片段.ppt(23页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、多聚酶链式反应(PCR技术), 是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为DNA体外扩增技术。,课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段,1、DNA分子的组成成分和结构,DNA 分子的基本组成单位是 .共有 种,每个基本单位是由一分子的 、一分子的 、和一分子的 构成。,脱氧核甘酸,4,磷酸,碱基,脱氧核糖,?,那么DNA分子的平面结构怎样呢?,二 、基础知识,A,G,C,T,1、DNA的基本单位脱氧核苷酸,2、DNA分子的平面结构,5端,3端,识别 : DNA分子的3 端与5 端 -OH端为3 ; 磷酸基团的末端为5。,2、DNA分子复制的过程,解旋酶,DNA母链,4种脱氧核苷酸,
2、DNA聚合酶,引物( RNA),打开DNA双链,模板,合成子链原料,催化子链合成,使DNA聚合酶能从引物3端开始连接脱氧核苷酸,思考:体内DNA复制的条件是什么? 体外扩增DNA 如何提供相似环境?,变性( 80-100 ),Taq聚合酶(耐高温),2030个核苷酸构成DNA或RNA,DNA双链,单链,变性(加热80-100 ),复性(缓慢冷却),4、DNA 分子的热变性原理:,变性的目的:,复性的目的:,解开双链,有利于引物和引物与两条单链的结合,一、PCR的原理( PCR的技术原理),时间(min),温度,(),适温延伸,高温变性,低温复性,重复13步30轮,3、DNA复制的方向,DNA的
3、合成方向总是从子链的5端向3端延伸,2、步骤:变性 复性延伸,PCR技术的原理总结,利用DNA分子的热变性原理,通过控制温度来控制双链的解旋与结合,从而完成体外DAN分子的扩增。,体外DNA复制的条件: 四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、引物、 模板;缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。,复制的方向:子链的5端向 3端延伸。,二、PCR的反应过程,变性95oC,5,引物1,5,引物2,5,5,模板DNA,2530 次循环(复制)后,模板DNA的含量可以扩大100万(220)倍以上。,每个循环包括:变性 复性延伸,从第二轮循环开始,上一次循环的产物也可以作为模板参与反应,并且由引物延伸而成的D
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 课题 _ 多聚酶 链式反应 扩增 DNA 片段
链接地址:https://www.31doc.com/p-2116704.html