实验三 细菌的简单染色和革兰氏染色.ppt
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1、实验三,细菌的简单染色和革兰氏染色,一、实验目的及要求,学习微生物涂片、染色的基本技术, 掌握细菌的简单染色法。 学习并掌握革兰氏染色法,了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 巩固油镜的使用和无菌操作技术。,二、实验原理,简单染色法是利用单一染料使细菌着色以显示其形态的染色方法。常用于染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。 碱性染料电离时,其分子染色部分带正电荷,能和带负电荷的物质结合。由于细菌生长于中性环境中一般带负电荷,所以通常采用碱性染料使其着色。 当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时,细菌所带正电荷增加,因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染
2、料是前两者的结合物又称复合染料,如伊红美蓝、伊红天青等。,革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法,革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G)两大类。 G菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经番红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时的颜色。,三、实验器材,1.菌种:
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