骨髓细胞化学染色.ppt
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1、骨髓细胞化学染色,细胞化学染色是以细胞形态学为基础,利用化学反应原理,对细胞中的酶类、脂类、糖类及蛋白质等化学物质进行定性、定位或半定量分析的方法。 用于血液系统疾病的诊断、鉴别诊断及疗效判断;用于白血病细胞类型的判断。,基本步骤,1. 固定:目的是保持细胞固有结构和化学成份不变,分蒸汽固定和液体固定。 2. 显示:通过化学反应显示被测物质,有偶氮偶联法,联苯胺法,金属沉淀法等。 3. 复染:作为背景染色,使反应的细胞结构能更清楚显示出来。,原理 机体多余的铁以铁蛋白及含铁血黄素的形式储存。这些铁与低铁氰化钾在酸性溶液中发生反应而呈蓝色。,铁染色,试剂,40g/l亚铁氰化钾溶液。 4%盐酸(3
2、8%浓盐酸40ml,小心倒入340ml冷蒸馏水中,混匀) 20g/l伊红溶液。 甲醛溶液。,方法,取骨髓片2张,加固定液固定10min,水洗待干。 将II缓缓滴入I内,混合后染液滴于骨髓涂片上, 37C放置60分钟,流水冲洗数分钟 流水冲洗,一张待干观察外铁,一张冲洗后用核固红复染1分钟,冲洗待干,观察细胞内铁。,结果观察,幼红细胞核染成鲜红色,胞浆呈淡黄色,铁粒呈蓝绿色。 (1)细胞外铁:用低倍镜观察骨髓小粒,细胞外铁主要存在于巨噬细胞胞浆内,而被染成蓝色,再用油镜判断阳性程度。分为(-)、(+)、(+)、(+)、(+)。,细胞外铁阳性(+),(2)细胞内铁:油镜下计数100个有核红细胞,记
3、录阳性细胞(胞浆中有蓝色颗粒即铁粒幼细胞)的百分率。同时注意有无环形铁粒幼细胞(6颗以上,并绕核1/2以上者)。,环形铁粒幼红细胞,1.细胞内铁:计算100个中幼红细胞、晚幼红细胞,计数阳性率,正常值20-45%;铁颗粒1-5粒,一般不超过10粒。 2.细胞外铁:观察骨髓小粒中巨噬细胞胞浆内蓝色颗粒。正常为(+)或(+)。,参考值,临床意义 铁染色主要用于缺铁性贫血与铁粒幼细胞性贫血的诊断,也是指导铁剂治疗的一个灵敏而可靠的指标。特别是铁粒幼细胞贫血形成特有的环形铁粒幼细胞,也易与其他类型贫血区别。,中性粒细胞碱性磷酸酶 (NAP)染色(钙-钴法),原理 当细胞内的NAP活性存在时,在pH为9
4、.29.5的碱性条件下,它可将作用液中的基质-甘油磷酸钠水解,释出磷酸,进而与作用液中的钙离子结合,成为磷酸钙沉淀,再经过硝酸钴和硫化胺的作用,生成不溶性硫化钴,呈黑色沉淀定位于胞浆。,NAP染色测定(偶氮偶联法),检测原理 血细胞内的碱性磷酸酶(NAP)在碱性环境下,水解-磷酸萘酚钠,产生 -萘酚。后者与重氮试剂偶联形成有色沉淀物,沉淀物的显色深浅 与NAP活性成正比。 试剂盒组成 1. NAP固定液:1瓶5 2. NAPI液(-磷酸萘酚钠):1瓶 5 3. NAPII(坚牢蓝B+tris-HCl)液:1瓶 5 4.苏木素复染液:1瓶 5,方法,1.新鲜涂片滴加固定液(4 C)30秒,水洗待
5、干。 2.将I液置入II液混合成为基质液。将涂片置入后,37C放置30分钟,流水冲洗数分钟,取出待干。 3.苏木素复染1-2分钟,水洗,待干,镜检。 4.结果显示: 阳性细胞内出现暗红色沉淀物,定位于胞质。 阴性细胞内无红色沉淀物。,(-),(+),(+),(+),(+),(+)、(+)、(+),积分计算,在油镜下计数100个成熟中性粒细胞,包括杆状核和分叶核粒细胞,结果分级为(-)、(+)、(+)、(+)、(+),分别为0-4分,所有细胞分值之和即为积分值,阳性细胞之和为阳性率。正常范围:10-100分,阳性率10-50%,注意事项,1.标本宜新鲜,若不能及时测定可先用固定液处理后,可保存数
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- 骨髓细胞 化学 染色
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