5.1《DNA的粗提取与鉴定》活动单李百胜.doc
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1、江苏省如皋中学高二生物活动单 现代生物技术实践专题 DNA的粗提取和鉴定知识要点:1DNA的物理化学性质,尤其是DNA的溶解性;2二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。一、DNA的粗提取的原理思考1:DNA存在于真核生物细胞的哪些部位?思考2:提取生物大分子的一般思路是什么? 1、DNA的性质:DNA和蛋白质的溶解性、对酶、高温和洗涤剂的耐受性在NaCl溶液中的溶解度对蛋白酶的耐受性对高温的耐受性对洗涤剂的耐受性DNA蛋白质0.14mol/L NaCl浓度|溶解度DNA粗提取的原理有些哪些?、DNA在 mol/L NaCl溶液中溶解度最小、DNA不溶于 溶液,而蛋白质等能够溶解2、DNA鉴定的原理:
2、在 的条件下,DNA遇 会被染成 。二、DNA粗提取的主要步骤:1、材料选择:适于作实验材的材料:选用 的生物材料;如鸡(红)血,其适宜作为实验材料的原因:鸡血(红)细胞核的DNA含量丰富,材料易得;鸡血细胞极易吸水胀破。 哺乳动物红细胞呢?破碎细胞,释放DNA(核物质)方法:将510mL鸡血细胞液加入20mL 中;用玻棒同方向搅拌5min;用34纱布过滤,以除去颗粒较大的杂质过滤;收集 。目的:破坏细胞,释放核物质注意:搅拌不能用力过大,以防止打碎DNA分子;DNA存在:多数与蛋白质结合,存在于滤液中2、主要实验步骤(以鸡血红细胞为例):溶解细胞核内DNA方法:向滤液中加入2倍体积的 mol
3、/LNaCl溶液,搅拌1min;过滤获取 目的:使与DNA结合的 解聚,释放出 ;DNA溶解于高溶液NaCl溶液中注意:按同一方向搅拌DNA析出方法:沿烧杯壁向滤液中缓慢加入蒸馏水,并轻轻按同一方向搅拌,使DNA析出,直到 ;可以在玻棒上收集到黏稠物(或过滤或离心收集黏稠物)目的:降低NaCl溶液浓度达到 mol/L左右,使DNA析出注意:加入的蒸馏水不能过多,使NaCl溶液浓度过低,DNA又会 黏稠物:丝状、略带黄色(DNA分子上附着有少量蛋白质)DNA的初步纯化方法:向20mL 2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物,并按同一方向搅拌3min,使DNA充分溶解;过滤,收集滤液;向滤液中贴壁缓
4、慢加入50mL冷冻的95%乙醇,并用玻棒按同一方向缓慢、均匀地搅拌,在玻棒上收集白色丝状物(DNA)原理:DNA不溶于 中,而蛋白质能溶于 中。归纳:本实验中几次过滤?过滤的目的是什么? 过滤一: 过滤二: 过滤三: 本实验中几次加入蒸馏水的目的各是什么?第一次:向鸡血细胞液中加入蒸馏水,目的: 第二次:向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸馏水,目的: 拓展:1、以菜花为材料进行实验时,如何获得核物质? 取材、剪碎加入洗涤剂、食盐研磨、过滤加洗涤剂的目的: 加入食盐的目的: 2、分析教材中方案一、二、三的原理。 方案一: 方案二: 方案三: 3、探究不同方法、洗涤剂、食盐用量对DNA
5、粗提取量的影响(说说实验思路)三、DNA的鉴定:1、方法:取甲、乙两支试管,并向其中加入5mL(等量)的2mol/LNaCl溶液;向甲试管中加入粗提取的DNA,并搅拌使DNA溶解;向两支试管中各加入4mL(等量)二苯胺试剂,混匀,沸水中加热5min,待试管冷却后,比较两支试管的颜色(蓝色)变化。2、注意点:实验中需要对照,目的:证明 四、实验结果分析与评价1、实验结果评价:是否提取到DNA?观察提取的DNA颜色:如果不是白色丝状物,说明DNA中的杂质较多;二苯胺鉴定:出现蓝色说明实验基本成功,如果不呈现蓝色,可能所提取的DNA含量低,或是实验操作中出现错误,需要重新制备。2、粗提取得到的丝状物
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