原核生物遗传分析.ppt
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1、第六章 病毒与原核生物的遗传学分析,优点: 生活周期短 单倍体,无显隐性关系 研究方法简单 灵敏度高,第一节 噬菌体(病毒)的遗传学分析 一、噬菌体的基本特征 温和噬菌体 烈性噬菌体,二、噬菌体杂交与基因定位 噬菌体的杂交方法:混合感染(复感染、双重感染) 重组合 重组频率= x 100% 重组合+亲组合 例: 1955年 Kaiser 的噬菌体实验 + + + x s mi co1 杂交 s:小噬菌斑,mi:微小噬菌斑,co1:中央浑浊小点的噬菌斑。,作图: 3.76 6.16 s co1 mi 8.2 + 2 x 0.86=9.92,第二节 细菌杂交与基因定位 一、E. coli 的性因子
2、 F因子(性因子、致育因子): 1946年J. Lederberg 在大肠杆菌中有杂交现象,并进一步发现了性因子F。 F因子共有15个基因,3 .5 x 106道尔顿, 6 x 104bp F+:含有F因子的细胞(菌株),具有性伞毛(接合管) F-:不含F因子的细胞(菌株),2、F因子与性导 附加体:具能游离于染色体外而独立存在,又可重组于染色体上的遗传因子称为附加体。 F因子是一种附加体。 当F因子从染色体上切离时,可能发生不准确切离而带有宿主的部分基因,这种游离的F因子称为F因子。 F因子的转移可以导致F因子上宿主基因的转移。,3、Hfr菌株 当F因子重组在宿主细胞染色体上时,F因子仍然可
3、以发生转移,此时的转移可推动宿主基因的转移,因此这种菌株称为高频重组菌株(high frequence of recombination, Hfr) F因子推动染色体的转移是以F因子的一端开始,沿F因子所处位置的相反方向进行转移,F因子最后才转移。所以染色体在F因子的推动下发生的转移具有一定的方向和顺序。,二、中断杂交与基因定位 1954年利用Hfr菌株的染色体转移特征(方向性和顺序性),进行了E.coli染色体的基因定位。 Hfr: thr+ leu+ Azs T1s lac+ gal+ strs(供体) F-: thr- leu- Azr T1r lac- gal- strr (受体) 让
4、两种细胞混合,37水浴一定时间后取样,组织捣碎机中断杂交,而后涂布在含Str的基本培养基上,考察供体基因在受体细胞出现的时间及顺序(基因转移的时间及顺序)。 概念:选择性标记与反选择性标记,8 8.5 9 11 18 25,thr leu Az T1 lac gal,三、非中断杂交与基因定位(重组作图) 利用F因子可以推动染色体到受体细胞中的特点,将要考察的基因全部转移到受体细胞中,然后考察各种基因型出现的频率,根据重组值计算公式计算重组值,进行作图。 为保证要考察的基因全部转移到受体细胞中,选择性标记必需处于转移的末断。 细菌基因重组的特征:与真核生物相比,原核生物的基因重组有两个特征,一是
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