淀粉中还原糖的测定.ppt
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1、还原糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法,班级 : 生科2班 姓名 : 胡雨雨 同组人 :张贤明,实验目的,1. 掌握还原糖和总糖测定的基本原理。 2. 学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。,实验原理,还原糖是具有还原性的糖类的统称。分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。 在碱性条件下,还原糖与 3 , 5 一二硝基水杨酸共热, 3 , 5 一二硝基水杨酸被还原为 3-氨基 -5- 硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系
2、, 540nm 波长下测定棕红色物质的消光值,查对标准曲线并计算,便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。,仪器、试剂、材料,仪器 : ( 1 )试管X 11 ( 2 )玻璃漏斗 X2 ( 3 )烧杯: 1OOml X 1 ( 4 )三角瓶: 100m1 X 1 ( 5 )容量瓶: 100ml X 3 ( 6)恒温水浴 ( 7)沸水浴 ( 8)电子天平 ( 9)分光光度计 试剂 : ( 1 ) 1 mg/ ml 葡萄糖标准液:准确称取 10mg 分析纯葡萄糖(预先在 8 0 烘至恒重),置于小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转移到 10ml 的容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度,摇匀,冰箱中保存备用。
3、 ( 2 ) 3 , 5- 二硝基水杨酸试剂:将 0.315g 3, 5- 硝基水杨酸和 13.1ml 2mol/NaOH溶液,加到 25ml 含有 9.25g 酒石酸钾钠的热水溶液中,再加 0.25g 结晶酚和 0.25g 亚硫酸钠,搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至 50ml ,贮于棕色瓶中备用。 材料 : 食用面粉。,注意事项,1. 沸水浴时应将试管口用保鲜膜封住,以防止水分蒸发引起体积误差。 2. 应该待反应体系稳定后进行比色(约10min)。 3. 比色时,比色皿中盛放的溶液体积不应过多,一般在2/33/4。 4. 比色时不能将溶液溅在仪器面板和仪器内。 5. 标准曲线制作与样品含糖量测
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