大孔树脂分离精制葛根芩连汤的工艺研究.doc
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1、精品论文大集合大孔树脂分离精制葛根芩连汤的工艺研究李君富,韦娟,李肖屹,罗燕,尹蓉莉成都中医药大学,四川成都(611130)E-mail: 摘要:目的:优选葛根芩连汤的大孔树脂分离精制工艺;方法:以葛根素与黄芩苷的吸附量及洗脱率为指标,选择树脂型号,并考察上样速度,最大上样量,洗脱剂浓度、用量及洗 脱速度等因素对葛根素及黄芩苷含量的影响;结果:最佳工艺如下:大孔树脂型号为 D141, 上样速度为 2BVh-1,最大上样量为 4 倍柱体积,洗脱剂为 70%乙醇,洗脱速度为 3 BVh-1, 洗脱剂用量为 5 倍柱体积;结论:D141 型大孔树脂综合性能优良,适合葛根芩连汤的分离 精制。关键词:大
2、孔树脂;葛根素;黄芩苷;吸附量;洗脱率葛根芩连汤出自伤寒论,由葛根、黄芩、黄连、甘草等四味药组成,具有清热燥湿, 升清止泻等功效,常用来治疗湿热泄泻、急性肠炎、细菌性痢疾等疾病1,临床现已开发出葛 根芩连丸、葛根芩连片等传统剂型。本课题为减小剂量,提高临床疗效,丰富其临床剂型, 拟将其制成分散片。但中药分散片由浸膏入药,虽经醇沉等传统工艺除杂,仍然普遍存在出 膏率大,崩解迟缓的问题。为解决此问题,作者应用近年来广泛运用于中药制剂分离纯化领 域的大孔树脂精制葛根芩连汤,方法简便可行,取得了取得了令人满意的结果。1. 材料和仪器WATERS 2695/2996 型高效液相色谱仪( 美国);Sart
3、orius BP2110 型电子天平(德国赛 多利斯公司);所有药材均购于成都市西南大药都;葛根素标准品(中国药品生物制品检定所,批号 (0752-20020);黄芩苷标准品(中国药品生物制品检定所,批号 110715-200212);大孔树 脂:D101、DM-301 型(天津市海光化工有限公司),AB-8、X-5、NKA-9 型(天津南开大学 化工厂),D141 型(成都晨光化工研究院);甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。2. 方法和结果2.1 含量测定方法的建立2.1.1 HPLC 法测定葛根素的含量参考中国药典2005 版一部中葛根素的含量测定方法进行测定2。色谱条件 色谱
4、柱为 Dikma Diamonsil 柱,检测波长为 250 nm,流速为 1.0mLmin-1,柱温 为 30,流动相为甲醇-水(25:75),理论塔板数按葛根素计不得少于 4000。标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重的葛根素标准品 11.96mg,置 25mL 的容量瓶中,甲 醇定容后,从中精密吸取 2mL,转移置 10mL 的容量瓶中,甲醇定容,摇匀,既得 95.68gmL-1 的葛根素标准品溶液。取葛根素标准品溶液,分别自动进样 2,5,8,12,15,20L,按上 述色谱条件测得峰面积。以峰面积为纵坐标,葛根素含量(g )为横坐标,得回归方程 y=40313476x+425052(R
5、=0.9993),葛根素在 0.192g1.921g 之间呈良好的线性关系。供试品溶液的制备 量取洗脱液适量,挥干溶剂,残渣加甲醇适量,超声使溶解,0.45m微孔滤膜滤过,既得。- 6 -2.1.2 HPLC 法测定黄芩苷的含量参考中国药典2005 版一部中黄芩苷的含量测定方法进行测定2。色谱条件 色谱柱为 Dikma Diamonsil 柱,检测波长为 280nm,流速为 1.0mLmin-1,柱温 为 30,流动相为甲醇-水-磷酸(47:53:0.2),理论塔板数按黄芩苷计不得少于 2500。标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重的黄芩苷标准品 8.20mg,置 25mL 的容量瓶中,甲醇 定
6、容后,从中精密吸取 2mL,转移置 10mL 的容量瓶中,甲醇定容,摇匀,既得 65.60gmL-1 的黄芩苷标准品溶液。取黄芩苷标准品溶液,分别自动进样 1,2,5,10,15,20l,按上 述色谱条件测得峰面积。以峰面积为纵坐标,黄芩苷含量(g)为横坐标,得回归方程 y=2483070x-59389(R=0.9994),黄芩苷在 0.0656g1.312g 之间呈良好的线性关系。供试品溶液的制备 同 2.1.1 项下操作。2.2 上柱液的制备按处方量称取药材,加药材量 8 倍的 50%乙醇回流提取两次,每次 1.5h,合并滤液,回 收乙醇至无醇味,5000rmin-1 离心 30min,取
7、上清液加水适量,配成含生药 0.4gmL-1 的溶液 备用。测得葛根素及黄芩苷的物质量浓度分别为 4.53mgmL-1,6.74mgmL-1。2.3 静态吸附取 6 种未经预处理的干大孔树脂各 10 g,分别用乙醇连续洗涤数次,洗至加适量水无白 色浑浊现象,再用蒸馏水洗至流出液澄清,用 1 molmL - 1 的盐酸溶液冲洗后用蒸馏水洗至中 性,再用 1 molmL - 1 的氢氧化钠液冲洗后再用蒸馏水冲洗至中性即可 。分别加入 100mL 葛根芩连汤上柱液,每 10min 振摇一次,振摇 2h,静置过夜,使达饱和吸附。分别取各树 脂吸附后的溶液测定葛根素、黄芩苷的含量。按下式计算各树脂的吸附
8、量,结果见表 1。树脂吸附量/mgg-1 树脂=(C0-Cr)V/W式中,C0 为原液浓度/mgmL-1;Cr 为吸附后浓度/mgmL-1;V 为吸附液体积/mL;W 为树脂 重量/g。2.4 静态洗脱取上述吸附饱和的树脂分别加入 50%乙醇 50mL,每 10min 振摇一次,振摇 2h,静置过 夜,滤过,收集续滤液,分别测定其中葛根素、黄芩苷的含量。按下式计算洗脱率,结果见 表 1。洗脱率=CDVD/ (C0-Cr )V 100%式中,CD 为洗脱液浓度, VD 为洗脱液体积, C0 , Cr , V ,同上表 1 6 种大孔树脂对葛根素及黄芩苷的吸附量与洗脱率比较树脂型号葛根素吸附量葛根
9、素洗脱率黄芩苷吸附量黄芩苷洗脱率/mgg-1 树脂/%/mgg-1 树脂/%D10125.2278.5644.3279.63D14135.3885.3255.1487.96DM-30121.4569.6539.8777.81AB-833.8081.1251.3583.64X-526.3370.2446.5169.93NKA-918.2177.3628.6578.69由表 1 结果可知,D141 与 AB-8 型树脂对葛根素及黄芩苷的吸附量明显大于其他树脂,且二者的洗脱率都达到了 80%,故选择 D141 与 AB-8 型树脂进行下一步动态筛选。2.5 动态吸附-洗脱取 D141 与 AB-8
10、型树脂各 10g,预处理同静态吸附,湿法装柱(柱体积大约 20mL)。 分别取 100mL 上柱液以 2BVh-1 的流速上样,先用 4BV 水以 4BVh-1 的流速洗脱,再用4BV50%乙醇以 4BVh-1 洗脱,收集洗脱液,分别测定流出液及 50%乙醇洗脱液中葛根素及黄 芩苷的含量,计算干树脂的动态吸附量及洗脱率,结果见表 2。表 2 D141 与 AB-8 型树脂对葛根素及黄芩苷的吸附量与洗脱率比较树脂型号葛根素吸附量葛根素洗脱率黄芩苷吸附量黄芩苷洗脱率/mgg-1 树脂/%/mgg-1 树脂/%D14131.3388.7451.3689.21AB-829.6582.2344.4584
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- 关 键 词:
- 树脂 分离 精制 葛根 芩连汤 工艺 研究
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