Van Gieson胶原纤维染色方法的探索.pdf
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1、】5 8 0 塞丑匡堇盘盍! 嫂! 堡垒旦筮! 堡鲞筮! ! 翅( 鱼王! 21 丛! :垒四! :! 塑! :! ! ! :! ! :塑! :! ;( 地! 型量! ! 旦堡! 旦! ! 立 表1R e t 蛋白在H D 的表达 结果 堑型 扩张段移行段狭窄段对照组 2 2 肠管 段神 无G 结果孺矿面西麴嗉穰1 而 3 讨论 自从发现H D 以来,人们对它的认识逐渐加深,目前大多 数人认为,H D 是多基因遗传性疾病。研究表明R e t 原癌基因 与消化系统、周围及中枢神经系统多种前体细胞的增殖、分 化、存活有关。R e t 基因长约8 0k b ,含2 0 个外显子,编码一种 酪氨酸激酶
2、受体,它在神经脊源性细胞( 周围神经系统的神 经节细胞和中枢神经元) 中均有表达J 。R e t 基因的编码产 物是酪氨酸激酶受体( T K R ) ,T K R 的基本功能是将细跑外信 息转化为可传人胞内的化学信号。R e t 突变后使T K R 功能受 损,活性降低乃至缺乏,从而导致胚胎时期神经节细胞移行受 阻,当R e t 表达量减少一半时,神经节细胞就不能移行到肠壁 内导致H D 发生。3 j 。G D N F 是神经营养因子,在中枢和外周 神经系统中发挥作用,G D N F 家族神经营养因子信号是通过 复合受体途径实现的,复合受体由两部分组成,第一部分是糖 基化的磷脂酰肌醇( G P
3、 l ) ,为G D N F 受体a ( G F R a ) ,另一部分 为原癌基因C r e t 编码的产物蛋白R e t ,它是一种受体酪氨酸 激酶,G F R a 能特异性地结合G D N F 家族成员,促使R e t 磷酸 化,导致一系列胞内途径的激活,从而发挥G D N F 神经营养因 子的生理功能”J 。由于G D N F 是一种膜外蛋白,无法单独进 行信号传导,R e t 是一种跨膜蛋白,它与G F R a 协同作用,共同 参与G D N F 家族营养因子细胞内外的信号传导。因此,G D N F 或R e t 的表达缺失,均可导致神经细胞信号传导受阻,疾病发 生。 目前的研究已证
4、实,R e t 基因的突变在家族性H D 中约占 5 0 ,在散发性病例中约2 0 。我们采用免疫组化法检测 到,R e t 阳性表达广泛分布于正常结肠肌间及黏膜下,在移行 段R e t 的染色强度和量都明显减少,在H D 狭窄段无神经节 细胞阳性表达,由于R e t 的突变,导致胚胎时期神经节细跑移 行受阻,病变肠段肠神经系统发育障碍,从而形成H D 。G D N F 对于神经系统的发育及营养有重要意义,G D N F 促使从胚 胎肠独立出来的肠神经前体细胞的生存、增殖及分化,其表达 缺陷使神经前体细跑过早凋亡而引起肠神经系统发育障碍。 这与我们在H D 狭窄段检测不到G D N F 表达结
5、果一致。 以前H D 的诊断全部依赖于x 线,难免会出现误诊,给患 者带来不必要的伤害,全层活检是H D 组织学诊断的最可靠 依据。然而,这种方式需要全身麻醉,并且有发生肠狭窄和穿 孔的危险。吸取活检狭窄段肠黏膜和黏膜下层样本是较为安 全的方法,已被愈来愈多的医生使用,但由于所取组织较小, 黏膜下神经元不典型等因素,存在一定的误诊率,我们研究发 现:R e t 和G D N F 在H D 的扩张段强阳性染色,在狭窄的肠管 黏膜下无染色,因此在活检肠组织中检测R e t 和G D N F 蛋白, 可以减少H D 误诊的发生,是一种创伤小、准确率高的诊断 H D 方法,为H D 手术方案的选择提供
6、最可靠的依据。 参考文献: 1 E n gC T h eR e tp r o t o - o n c o g e n eI nm u l t i p l ee n d o c r i n en e o p l a s i a t y p e 2H i r s c h s p r u n g Sd i s e a s e J NE n g lJM e d ,1 9 9 6 ,3 3 5 :9 4 3 9 5 1 2 Gl o v a n nR o m e o ,P a t r i z i eR o n c h e t t o ,Y i n l u o ,e ta 1 P o i n tm u t
7、 a t i o n s a f f e c t i n gt h et y r o s i nK i n a s ed o m a i no ft h eR e tp r o t o o n c o g e n ei n H i r s c h s p m n g d i s e a s e J N a t u r e ,1 9 9 4 ,3 6 7 ( 2 7 ) :3 7 7 - 3 7 8 3 管涛,李继承,李民驹,等中国人先天性巨结肠R e t 基因突变家 系研究 J 中华小儿外科杂志,2 0 0 3 ,2 4 ( 6 ) :5 1 6 - 5 1 7 4 M a r t u e e
8、 i e l l oGT h o m p s o nH ,M a z z d aC ,e ta 1 G D N Fd e f i c i tH i r s c h s - p r u n g d i s e a s e J 】J P e d i a t rS u r g ,1 9 9 9 ,3 3 ( 1 ) :9 9 1 0 2 ( 收稿日期:2 0 0 7 - 0 1 1 2 ) V a nG i e s o n 胶原纤维染色方法的探索 张赛霞,黎晖,陈东风 ( 广州中医药大学,广东广州5 1 0 4 0 5 ) 关键词 V a nG i e s o n 染色法;胶原纤维;褪色 中图分类号
9、 R - 3 3 1 文献标识码 B 文章编号 1 6 7 1 - 5 0 9 8 ( 2 0 0 7 ) 1 2 1 5 8 0 - 0 2 在科研工作中,普遍使用V a nG i e s o n 染色法显示胶原纤 维,但该法中各种染液的对抗作用往往不易得到满意的效果。 如苦味酸对细胞核有褪色作用,酸性品红与苦味酸混合的比 例不同直接影响染色结果。如何优化三者问的关系,使染色 达到最佳效果,我们进行了以下探索。 1 材料与方法 1 1 染液配制 1 1 1 W e i g e r t 铁苏木素染液 A 液:苏木精1g ,无水乙醇 1 0 0m l 。B 液:3 0 三氯化铁4m I ,蒸馏水
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