三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较.pdf
《三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较.pdf(4页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、成l o u m a 都lo f 聪M e 院d i e a l 学C o l l e 报s e 猢妇3 ( 1 ) Q 神M 。、I 论著 三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较 刘阳1 ,杨淑霞1 ,李敏惠1 ,胡松1 ,任文娟2 ,邹 强1 。 ( 成都医学院1 科研中心;2 医学检验系0 6 级检验本科一班,成都6 1 0 0 6 3 ) 【摘要】目的探讨补镁对高脂高糖膳食诱导大鼠肥胖模型形成的影响及作用机制。使用染胶法、染样品 法及后染法比较溴化乙锭( E B ) 与3 种新型核酸染料G o l d V i e w n a1 1 、G o l d V i e w 及D N AG r
2、l 弛n 染色D I 、I A 的灵敏度。方 法在琼脂糖凝胶电泳中,分别在3 种染色方式下使用4 种核酸染料对凝胶中的D N A 进行染色,观察并分析电泳 结果。结果核酸染料比较结果:G o t d V i e w n al I 的灵敏度最高,D N AG i 既n 的灵敏度与E B 相当,C o l d V i e w 的灵敏 度略低于皿。染色方式比较结果:使用染胶法的灵敏度最高,后染法次之,染样品法最低。结论三种新型核酸 染料完全可以替代E B ,用于琼脂糖凝胶电泳D N A 染色。使用新型核酸染料建议采用染胶法染色D N A 。 【关键词】琼脂糖凝胶电泳;核酸染料;溴化乙锭 【中图分类号
3、】R 一3 3【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 4 2 2 5 7 ( 2 0 0 8 ) 0 1 一0 0 2 0 一0 4 C o m p m - a t i v eA n a l y s i so ft h eS e n s i t i v i t yo fF o u rN u c l e i cA c i do y e sS t a i n i n gD N Ab yT h r e e S t a i n i n gM e t h o d s L I I IY a n g ,Y A N GS h u x i a I ,L Il V I i n h u i l ,删s D l l
4、g I ,l I E NW e n j u a n 2 ,Z O UQ i a , 1 9 1 ( 1 C e n t e ro f R e s e a r c ha n d 翻孵翻倒獭溉。2 C a s sO n eG r a d e2 0 0 6 ,删o y a b o r a t o r yM e d 豇n e ,C h e n g d uM e d a d 咖, 6 1 0 0 8 3 ,c h , , a ) A 蛔峨d :O b j e c t i v eI “ oc o m p a r et h e 艇m s i t i v i t yo fe l h i d i mb z o
5、m i d e ( E B ) a n dt h r e et y p e so fn e wn u c l e i ca c i dd y e :G o l d V i e w n a 1 1 ,G o l d V i e wa n dD N AG r e e ns t a i r 崦D N Ab yt h r e e 或a i l l i I l g 班吐h D d s :p r e s t a i n i n gg e lm e t h o d ,p r e s t a i m gs a m p l em e t h o da n d p 0 曲咖洒l l gm e t t l o d
6、M e t h o d sF o u rn u c l e i ca c i dd y e s 慨r e e dt os t a i nD N AI e s p 蒯v e l yb yt h r e es t a i r l i I l gm e n t h o d si na g a r o g e l 越哟p l l o 地豳a n dt h er e s u l t s 讹陀o l 张n v e da n d 锄a l y z e d 1 蚓伍T h ec , o m p a 枷v er e s u l to fn u c l e i ca c i dd y e :t h es e n
7、s i t i v i t y 矗 G o l d V i e w n aI I i sh i g h 耐o fa l l ;t h es e m i t l v i t i e so fD N AG r e e na n dE Bl n ei nt h es t l m ed e g 胱;t h es e n s i t i v i t y0 fC o l a V i e wi sl e s s I h a nE B T h ec o l n p m 6 v er e s u l to f 或“n gm e t h o d _ , T I l es e n s i t i v i t yo
8、f 曲岫D N Ab yp 髓血1 1 9 耐m e t h o di sh i g h 臼to ft h e l h r e ea n d 吨姻i I l :i 1 1 9m e t h o di sh i 曲瞳t h a np l 精纽访i I l gs a m p l en 纠h D d 。C o l l d l l l 商O nT h e s et h r e et y p e so fn 哪n u d e i ca c i dd y e 锄 s u l 铽J l l l l ef o r 髓聃ag e n e r a la y et os t a i nD I 、I Ai na g
9、a r o g e ld e e t r o p h o r e m I ti sr e e o m 唑n d o dt o 峨胁“n i I l gg e lm e t h o d w h e nu s i n gn 鲫t y p eo fn u c l e i ca c i dd y e K e yw o 瞌:a g a m s eg e le l t h o p h o r e s i s ;n u c l e i ca c i d , i r e ;E t h i d i u mb m n i d e 溴化乙锭( E B ) 曾是琼脂糖凝胶电泳中使用 最为普遍的核酸染料,被广泛应用于观
10、察、检测核 酸,具有操作简单、快速及灵敏度高等特点 1 l 。但 收疆日期2 0 0 7 1 2 2 5修回日期2 0 0 8 一O l 一2 9 基金项目四川省教育厅资助项目( 2 0 0 6 A 1 3 4 ) 。成都医学院科 技基金项目( 0 6 劢0 0 6 0 0 1 ) 作者简介刘,日( 1 9 8 0 一) ,男。成都市人,项士,助教, 从事分子生物学研究。T e l :0 2 8 6 8 2 8 9 憾3E 一皿丑:s e u i m 5 1 8 1 2 6 c l o m 。通讯作者E m a i l q i l m g 啦仞 g r n a i l c o n l 作为一种
11、强诱变剂,E B 具有高致癌性。废弃的E B 染液易污染环境,必须进行净化处理,给实验研究 人员带来诸多不便1 。 近年来陆续推出了多种新型核酸染料,比如 G o l d V i e w n a1 I ,G o l d V i e w ,D N AG r e e n 等。这些核酸 染料的灵敏度是否高于E B ,能否替代E B 广泛用于 D N A 的染色是人们关心的问题。 有研究显示E B 染色D N A 使用后染法比较 好2 。那么,新型核酸染料使用染胶法、后染法还 是染样品法的检测灵敏度最高,最实用呢? 万方数据 刘阳,等三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较 2 1 本文在3 种染色方式
12、下分别使用4 种核酸染料 对凝胶中的D N A 进行染色。在3 种染色方式下比 较4 种核酸染料的灵敏度,为相关实验中选择合适 的核酸染料和染色方法提供参考。 1 材料与方法 1 1 主要试剂 电泳级琼脂糖购自西班牙B I O S C I E N C E 公司。 分子量标准D L1 50 0 0 + 20 0 0 购自T a k a r a 公司。E B 为S i g m a 公司产品,工作浓度为0 5t , e , n a 。G o l d V i e w n aI I 型核酸染料( 50 0 0 ) 购自北京博大泰克 生物基因技术有限责任公司,工作浓度为l G o l d V i e w
13、( 2 00 0 0 ) 为北京赛百盛基因技术有限 公司产品,工作浓度为1 ;D N AG r e e n ( 1 00 0 0 ) 为天泽基因工程有限公司产品,染胶与染样品 的工作浓度为1 ,后染的工作浓度为1 0 ;其余 试剂均为国产分析纯。 1 2 主要仪器 B i o P a d 电泳系统及凝胶成像系统。 1 3 方法 1 3 1 染胶法同时制备四块1 琼脂糖凝胶。在 凝胶凝固前,分别加入4 种染料。待凝胶冷却凝固 后,放入同一电泳槽中。于不同泳道中分别加入 0 5r i g 、1n g 、2n g 、5T l g 、1 0T l g 、2 0n g 及5 0I l g 的 D L1
14、50 0 0 + 20 0 0 使用5 V e r n 的电压进行电泳, 最后用凝胶成像系统观察拍照。 1 3 2 染样品法同时制备四块不加染料的l 琼 脂糖凝胶。待凝胶冷却凝固后,放入同一电泳槽 中。将分别将0 5n g 、1n g 、2n g 、5I l g 、1 0l 】g 、 2 0n 圾5 0n g 的D L1 50 0 0 + 20 0 0 与4 种染料混合, 避光1 0r a i n 然后于不同泳道中加入。使用5 V e r a 的电压进行电泳,最后用凝胶成像系统观察拍照。 1 3 3 后染法同时制备四块不加染料的1 琼脂 糖凝胶。待凝胶冷却凝固后,放入同一电泳槽中。 于不同泳道
15、中分别加人0 5n g 、1n g 、2n g 、5I l g 、 l Ol l g 、2 0l l g 及5 0I l g 的D L1 50 0 0 + 20 0 0 使用 5 V e r a 的电压进行电泳。电泳后将凝胶分别浸入用 1 T A E 稀释的4 种不同染液中。按照说明书要求, G o l d V i e w n a 、G o l d V i e w 、D N AG r e e n 及E B 避光染 色的时间分别为6 0r a i n 、3 0m i l l 、3 0r a i n 、3 0m i n D N AG r e e n 染色完毕后还需用1 T A E 脱色3 0r a
16、 i n 最后用凝胶成像系统观察拍照。 2 结果与分析 2 1 染胶法 染胶法的结果( 图1 ) 表明四种染料使用该法 的灵敏度均最高,其中G o l d V i e w n aI I 能检测到的 D N A 含量约为0 5n g ;E B 能检测到的D N A 含量约 为1n g ;G o l d V i e w 与D N AG r e e n 能检测到的D N A 含 量约为2 唱 图l使用染胶法比较4 种核酸染料染色D N A 的灵 敏度 使用D N AG r e e n ( A ) ,G o l dv i e w n aI I ( B ) ,G o l dv i e w ( C ) 与
17、E B ( D ) 染色不等量的D L1 5 0 0 0 + 2 0 0 0 每个泳道的 D N A 上样量为:( 1 ) 0 5 n g ,( 2 ) l n g ,( 3 ) 2 n g ,( 4 ) 5 n g ,( 5 ) l o n g ,( 6 ) 2 0 唱,a n d ( 7 ) S O n s 飚1C 哪叩盯萱s o n0 f t h es u m v t t yd f o u rm l d e 薹ca c i d a r e s 舳g D N Ab yp n 或醯晌唱窘e l m 删 D i l u t i o n so fD L1 5 0 0 0 + 2 0 0 0w e
18、 r es t a l l e db yD N AG r e e n ( A ) ,G o l dv i e w n aI I ( B ) ,G o Mv i e w ( C ) o rE l l ( D ) T h e D N Al o a dp e rl a n eW a S :( 1 ) O 5 n g 。( 2 ) l n g ,( 3 ) 2 n s , ( 4 ) 5 n g ,( 5 ) 1 0 n g ,( 6 ) 2 0 a s ,a n d ( 7 ) S O n s 2 2 后染法 后染法的结果( 图2 ) 表明四种染料使用该法 的灵敏度低于染胶法。其中G o l d V
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 染色 方式 下四种 核酸 染料 灵敏度 比较
链接地址:https://www.31doc.com/p-3701319.html