大鼠孕期地塞米松给药次数对仔鼠脑星形胶质细胞发育的影响.pdf
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1、 8浙江预防医学2 0 0 6 年第 1 8 卷第9 期Z h e i i a n g P r e v M e d , S e p t e m b e r 2 0 0 6 , V o l 1 8 , N o . 9 大鼠孕期地塞米松给药次数对仔鼠 脑星形胶质细胞发育的影响 池美珠 陈超2 李建敏, 万丽 【 摘要】目的通过产前地塞米松治疗, 钱燕 探讨不同给药疗程对仔鼠脑星形胶质细胞发育的影响。方法 实验孕大鼠 随机分为3 种情况用药, 孕期1 剂组于孕1 7 d 肌注地塞米松0 . 8 m 盯 k g / d , 孕期4 剂组于孕1 7 , 1 8 , 1 9 , 2 0 d 各肌注地塞米松
2、0 . 8 m g / k g / d , 对照组肌注等量生理盐水。对各组孕鼠所生的仔鼠,分别于生后第 1 , 7 , 1 4 d 称脑重,检测大脑白质与海马胶质纤维酸性蛋白 ( G F A P )的表达情况,并与对照组作比较。结果孕 期激素治疗各组仔鼠全脑重量较对照组下降, 尤以4 剂组最明显;孕期激素治疗4 剂组7日 龄、1 4日龄鼠脑 海马、白质 G F A P 的表达较对照组减少,1 剂组与对照组相比无明显差异。结论大鼠孕期重复激素治疗会影 响后代脑星形胶质细胞的成熟。 【 关健词】大鼠;地塞米松;发育; 脑; 胶质纤维酸性蛋白 中图分类号:R - 3 3 2文献标识码:A文章编号:1
3、 0 0 7 - 0 9 3 1 ( 2 0 0 6 ) 0 9 - 0 0 0 8 - 0 3 I n fl u e n c e s o f Di f f e r e n t P r e n a t a l o f A s t r o c y t e i n O ff s p r i n g R a t s P r o c e d u r e o f D e x a me t h a s o n e ( D E X) o n t h e C H I M e i - z h u , C H E N C h a o , “J i a n - m i n , a l . ( T h e F i r
4、 s t .切 % l i a t e d H o sp it a l of W e n z h o u M e d i c a l C o l l e g e ,W e n z h o u 3 2 5 0 0 0 ,C h i n a . ) ( A b s t r a c t I O b j e c t s T o e x p lo re t h e i n fl u e n c e o f d iff e re n t p ro g r a m s o f a n t e n a t a l t r e a t m e n t w i t h d e x a m e th a s o n
5、 e ( D X M ) o n t h e d e v e l o p m e n t o f a s tro c y t e i n o ff s p r i n g r a t s a n d o b s e r v e t h e r e l a ti o n s h ip b e t w e e n d o s a g e a n d e ff e c t . M e t h o d s T h e p r e g n a n t S D r a t s w e re d i v i d e d i n t o 3 g ro u p s r a n d o m ly ( o n e
6、s in g l e - d o s e - tre a t m e n t , o n e f o u r - d o s e - tre a t m e n t a n d o n e c o n t r o l ) . R a t s in s i n g le - d o s e - t re a t m e n t g ro u p w e re i n j e c t e d I M w i t h D X M ( 0 . 8 m g / k g / d a y ) o n d a y 1 7 o f g e s t a t i o n , w h i l e r a t s i
7、n f o u r - d o s e - g ro u p w e re i n j e c t e d c o n s e c u t i v e l y o n d a y 1 7 , 1 8 , 1 9 , a n d 2 0 o f g e s t a t i o n . A n d r a ts i n c o n t r o l g r o u p r e c e iv e d e q u i v a l e n t v o l u m e s o f is o t o n i c s a l i n e o n s a m e t i m e p o i n t s w i t
8、 h f o u r - d o s e - g ro u p . T h e w h o l e b r a i n o f o ff s p r i n g r a t s f ro m d iff e r e n t g ro u p s w e re w e i g h t e d o n t h e 1 s t , 7 t h , a n d 1 4 t h d a y a f t e r d e l i v e ry r e s p e c t i v e l y . M e a n w h i l e th e e x p re s s i o n o f w h i t e m
9、 a t t e r a n d g l i a l f i b r i ll a ry a c i d ic p ro t e i n ( G F A P ) i n b r a i n s o f o ff s p r i n g r a t s w e r e m e a s u r e d . R e s u l t s T h e w h o le b r a i n w e i g h t s o f o ff s p r i n g r a t s f ro m g ro u p s t re a t e d w it h d e x a m e t h a s o n e ,
10、e s p e c i a l l y t h e f o u r - d o s e - g ro u p , w e r e l i g h t e r t h a n t h o s e f r o m t h e c o n tr o l g ro u p . A n d t h e e x p re s s i o n l e v e l s o f G F A P i n h i p p o c a m p u s a n d w h i te m a t t e r o f 7 - d a y - o l d a n d 1 4 - d a y - o l d o ff s p
11、r i n g r a t s f ro m f o u r - d o s e - g r o u p w e r e l o w e r t h a n t h e c o n t r o l g ro u p , w h e r e a s t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f G F A P i n o n e - d o s e - g r o u p h a d n o s ig n i f i c a n t d iff e r e n c e w i t h th e c o n t ro l g r o u p . C o n c l
12、 u s i o n R e p e a t e d a n t e n a t a l tre a t m e n t o n g e s t a t i o n a l r a t s d e l a y s a s t ro c y t e m a t u r a t i o n o f t h e b r a i n o f o ff s p r i n g r a t s K e y w o r d s I R a t ; D e x a m e t h a s o n e ( D X M ) ; D e v e l o p m e n t ; B r a i n ; G F A P
13、 产前糖皮质激素 ( A C T )治疗作为预防早产儿呼吸窘迫 综合症 ( R D S )的常规手段,目 前在临床上有重复应用增加 的趋势。人 C T 是细胞分化和成熟重要的调节因子,影响胶 质细胞 的成熟 和髓鞘生物合成途径。星形胶质细胞 ( A a s t ro c y te A S ) 是中枢神经系统中数量最多的细胞类型, 在 中枢神经系统扮演重要角色,对维持神经元的生存、发育、 再生和分化均有重要作用。它的分子量为 5 0 K D ,属细胞质 内的I F s 的一种成分,在诸多复杂的细胞活动中具有十分广 泛的作用。本研究以孕鼠为模型,对孕鼠在妊娠第 1 7 d 起 ( 相当于临床上孕妇
14、妊娠 2 8 周起)肌注地塞米松 ( 分为孕 期 1 剂组、孕期 4剂组,相当于临床上单程和多程治疗) 后,观察仔鼠脑重及脑海马、白质 G F A P的表达情况,了解 不同给药疗程产前糖皮质激素治疗是否对胎仔脑星形胶质 细胞的发育有不良影响,探讨产前激素治疗影响仔鼠脑发 育的机制,指导临床用药。 材料与方法 基金 项 目 Y 2 0 0 3 A 1 1 4 ) 作者单位 3 2 5 ( 又 旧;2. :温州市科学技术局资助课题 ( 项 目编号 :1 .温州医学院附属第一 医院,浙江 温州 复旦大学附属儿科医院 1 材料清洁级孕 S D大鼠由温州医学院实验动物中心提 供, 兔抗大鼠G F A P
15、 抗体,美国Z Y M E D公司提供,S P 试剂 盒、D A B 显色试剂盒购于北京中杉生物试剂公司。地塞米 松磷酸钠针剂为仙居制药产品,批号 0 5 0 1 1 1 ,规格为每支 1 m l : 5 m g o 2 用药与分组( 1 )对照组 ( n =8 ) :于妊娠第 1 7 , 1 8 , 浙江预防医学2 0 0 6 年第 1 8 卷第9 期Z h e i i a n g P r e y M e d , S e p t e m b e r 2 0 0 6 , V o l 1 8 , N o . 9 9 1 9 , 2 0 d( 孕足月2 1 一 2 2 d )各肌注生理盐水0 .
16、5 m 1 . ( 2 )孕 期 1 剂组 ( n = 8 ) :于妊娠第 1 7 d 肌注地塞米松0 . 8 m g / k g / d ( 稀释至0 . 5 m l ) ,第 1 8 , 1 9 , 2 0 d 各肌注等体积的生理盐水。 ( 3 )孕期4 剂组 ( n = 1 0 ) :于妊娠第 1 7 , 1 8 , 1 9 , 2 0 d 各肌 注塞米松0 . 8 m 酬k g / d . 3 仔鼠脑重的观察3 组孕鼠分娩后,取新生 1 , 7 , 1 4 d 龄仔鼠断头取脑称重,脑组织置 1 0 %中性甲醛固定 4 h ,梯 度酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,取冠状切面切片, 切片厚
17、度5 1 .m . 4 免疫组化检测S P 法进行免疫组化检测,每组随机选取 1 6 - 2 0 张不同仔鼠个体免疫反应切片,每张随机选取 5 个 视野,通过图像采集和计算机系统 ( 华东理工大学提供) , 计算各组仔鼠C F A P 平均吸光度值,分析比较星形胶质细胞 的相对含量。 5 统计学方法实验数据以均数士 标准差表示 土 s ) , 采用方差分析进行统计。 结果 1 A C 下对仔鼠脑重的影响l d 龄仔鼠,A C T各组脑重均有 降低, 7 d 龄和 1 4 d 龄仔鼠,产前 4 剂组脑重均有下降,见 表 1 表 , 各组仔鼠生后第 1 , 7 ,1 4 d 龄全脑重 ( x 士
18、s ) 7 d龄1 4 d龄 仔鼠数仔鼠数 对照组 1 剂组 4剂组 I d龄 全脑重 ( 9 ) 0. 3 6 3 t 0. 以 1 0 . 3 0 8 土0 . 0 3 5 . 0 . 2 9 2 t 0 . 0 2 9 . “ 1 6 1 8 1 8 全脑重 ( 8 ) 0. 8 6 2士0. 0 4 9 0. 8 2 2士0. 0 7 3 0 . 7 8 0土0 . 0 5 6 . 仔鼠数全脑重 ( 9 ) 1 6 1 8 1 8 1 . 2 9 5土0 . 1 . 2 7 2 t 0 . 1 . 1 8 7土0 . 0 1 9 0 9 6 0 7 4 . 1620加 与对照组比较 P
19、 0 . 0 5 ) ,见表 2 , 表 3 0 讨论 表2 7 d 龄大鼠脑 G F A P 表达 探士 s ) G F A P 吸光度 组别 海马白质 对照组 ( n 二1 6 ) 1 剂组 ( n 二1 8 ) 4 剂组 ( n 二1 8 ) 0 . 0 8 5 t 0 . 0 0 8 0 . 0 8 3 t 0 . 以沁 0 . 0 4 9土0 . 0 0 8 . * 0 . 1 1 5士0. 0 0 9 0. 1 1 6 t 0. 01 1 0 . 1 0 4 10 . 0 4 3 * 与对照组比较 P 0 . 0 5 , * 与对照组比较 P 0 . 0 1 表3 1 4 d 龄大
20、鼠脑 G F A P 表达 ( x 土s ) G F A P 吸光度 组别 海马白质 对照组 ( n = 1 6 ) 1 剂组 ( n = 1 8 ) 4 剂组 ( n 二1 8 ) 0 . 1 9 2土0. 0 2 4 0 . 1 9 4 10. 0 3 5 0 . 1 6 6 10 . 0 4 2* 0. 2 0 5 10 . 0 2 9 0. 2 0 8土0 . 0 2 4 0 . 1 5 5士0 . 0 3 2 . 与对照组比较P 0 . 0 5 , 二 与对照组比较 P 0 . 0 1 产前糖皮质激素治疗是否对后代脑发育有不良影响已 成为一个社会普遍关注的热点。近年来,随着 A C
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