大鼠坐骨神经切断后谷氨酰胺合成酶在脊髓后角内的表达变化.pdf
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1、 1 8 大鼠坐骨神经切断后谷氨酰胺合成酶 在脊髓后角内的表达变化 周聪发h ,易智华,潘爱华2 ,刘曾旭h ( 1 南昌大学医学院a 解割教研室;b 护理系,南昌3 3 0 0 0 6 ; 2 中南大学湘雅医学院人体解剖与神经生物学系,长沙4 1 0 0 1 3 ) 摘要:目的观察坐骨神经切断后不同时间点脊髓后角内谷氨酰胺合成酶( G s ) 的表达,探讨G s 对神经元的保护 机制。方法4 8 只S D 大鼠随机分为实验组( n = 4 0 ) 和对照组( 行一8 ) ,其中实验组右侧坐骨神经切断,大鼠手术后 分别存活1 、3 、7 、1 4 和2 1d ( 每时间点8 只大鼠) 。免疫组
2、织化学方法检测脊髓后角内G S 的表达变化。结果G S 主要表达于神经胶质细胞胞体内。坐骨神经切断后G S 表达开始增多,7d 时G S 表达最显著,之后G S 表达下降, 实验组各时间点与对照组相比具有统计学意义( P O 0 5 ) 。 结论坐骨神经切断后脊髓后角内G S 表达升高,这可能是G S 对神经元保护作用的反应。 关键词:后角;谷氨酰胺合成酶;神经胶质;神经元 动物,实验;s D 大鼠 中图分类号:R 一3 3 2文献标识码:A文章编号:1 0 0 0 一2 2 9 4 ( 2 0 0 8 ) 0 6 一o o l 8 一0 3 C h a n g e so fG l u t a
3、 m i n eS y n t h e t a s eE x p r e s s i o ni n P o s t e r i o rH o r no fS p i n a lC o r da f t e rS c i a t i cN e r V eC u t Z H O UC o n 酽f a l I ,Y IZ h i h u a l ,P A NA i _ h u a 2 ,L I UZ e n g - x u l I ( 1 a D P 户口,m e n zo ,A n 口t o ,n y ;1 b N M r s i 7 2F n c 乱Z z 了,M e d i c 口ZC o
4、Z o g PD ,N 口n c n n gU 咒i 勘P r s i y , N 口咒f 口咒g3 3 0 0 0 6 ,C ,l i 赡口;2 D e 户口r 7 n P 咒o ,A 靠口0 7 “ y & N P “,0 6 i o Z o g y , X i 口咒g y 口S f o o Zo , 彳P d i f i P ,C P 咒,口ZS o M f U 矗i 伽r s i y ,C 口,z g s 口4 1 0 0 1 3 ,( 冼i 咒口) A B S T R A C T :o b j e c t i v eT oo b s e r v et h ec h a n g e s
5、o fg l u t a m i n es y n t h e t a s e ( G S ) e x p r e s s i o ni np o s t e r i o rh o r no fs p i n a lc o r da td i f f e r e n tt i m ea f t e rs c i a t i cn e r v ec u ta n da p p r o a c ht h em e c h a n i s mo f G Sp r o t e c t i o nt on e u r o n M e t h o d s F o r t y e i g h tS Dr a
6、 t sw e r ed i v i d e dr a n d o m l yi n t oe x p e r i m e n t g r o u pa n dn o r m a lc o n t r o lg r o u p I nt h ee x p e r i m e n tg r o u p ,r i g h ts c i a t i cn e r V ew a so p e r a t i o ns i d e a n dl e f ts c i a t i cn e r v ew a sc o n t r o ls i d e A f t e rs c i a t i cn e r
7、 v ec u t ,r a t ss u r v i v e df o r1 、3 、7 、14a n d21 d a y s ,t a k eo u t8r a t si ne a c ht i m e T h ei m m u n o h i s t o c h e m i s t r ym e t h o dw a se m p l o y e dt od e t e c tG S e x p r e s s i o nc h a n g e R 皓u l t sG Sm a i n l ye x p r e s s e di nt h eb o d yo fg l i a lc e
8、l l G Se x p r e s s i o nw a si n c r e a s e da t1d a ya n dt h em o s tp r e d o m i n a n c ea t7d a y sa f t e rs c i a t i cn e r v ec u t ,t h e nG Se x p r e s s i o n d e s c e n d I th a ds t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c eb yc o n t r a s t i n gb e t w e e n1 、3 、7 、14 、21d a y
9、so fe x p e r i m e n t g r o u pa n dn o r m a lc o n t r o lg r o u p ( P O 0 5 ) C o n c l u s i o n T h ep h e n o m e n o nt h a tG S e x p r e s s i o ni np o s t e r i o rh o r no fs p i n a lc o r dw a se l e v a t o r yi sl i k e l yar e a c t i o no fG St op r o t e c tn e u r o na f t e r
10、s c i a t i cn e r v ec u t K E YW o R D S :p 稍t e r i o rh o m ;g I u t a m i n es y n t h e t a 驰;g l i a ;n e u r 帆;a n i m a l s ,I a b o r a t o r y ;S Dr a t s 谷氨酰胺合成酶( G S ) 作为一种酶广泛存在中 枢神经系统内,过去认为G S 是特异性分布于星形 ( 胶质) 细胞中,被看作是星形( 胶质) 细胞的一种标 记物,后来在周围神经节内卫星细胞、视网膜 M n l l e r 胶质细胞和少突神经胶质细胞1 3 都发现G
11、 S 存在。 收稿日期:2 0 0 8 一0 4 2 8 作者简介:周聪发( 1 9 7 4 一) ,男,硕士研究生,讲师,主要从事应用解剖学的研究。 万方数据 江西医学院学报2 0 0 8 年第4 8 卷第6 期鼻c f n A c 口d P m f 口PM P d i c f H 口PJ f n 甩g “2 0 0 8 ,V o l4 8 ,N o61 9 谷氨酸是中枢神经系统内主要的一种兴奋性神 经递质,在正常生理条件下,谷氨酸在神经突触末梢 释放到突触间隙内,通过起弥散功能激活神经元和 神经胶质上谷氨酸受体,产生正常生理效应,但是同 时有8 0 谷氨酸被神经胶质上转运体运输而快速 摄取
12、,在其胞内被G S 代谢产生谷氨酰胺,预防在突 触间隙内积累产生神经毒性效应导致神经元损伤或 死亡引。有报道 3 3 在脊髓L 。完全横断后7d 时G S 和谷氨酰胺在脊髓内表达都上调,认为两者上调是 清除胞外过剩谷氨酸的表现。至今尚未发现关于周 围神经损伤后G S 在脊髓灰质内的表达变化的报 道,本文通过观察大鼠坐骨神经切断后不同时间点 G S 在脊髓后角内的表达变化,进一步探讨G S 对神 经元的保护机制。 1 材料与方法 1 1 动物分组 健康S D 大鼠4 8 只,由中南大学动科部提供, 体质量1 8 0 2 2 0g ,雌雄不限。实验动物随机分为 实验组( ,z = 4 0 ) 和对
13、照组( 7 z 一8 ) ,其中实验组右侧 行坐骨神经切断手术,术后分1 、3 、7 、1 4 和2 1d5 个 不同时间点组,每个时间点8 只大鼠。 1 2 实验组大鼠动物模型制作 麻醉后固定,右后肢股中部纵切口约3c m ,梨 状肌下暴露坐骨神经,距梨状肌下孔O 5c m 处切除 O 5c m 神经段,将远断端翻转固定于肌肉中,注意 不要损伤神经下方的结构。术后抗生素预防感染, 分别在术后1 、3 、7 、1 4 和2 1d 处死。 1 3 组织制备 麻醉后先以生理盐水5 0 1 0 0m L 快速灌注, 然后用含4 多聚甲醛的O 1m o l L 的P B ( p H 7 2 7 4 )
14、 灌注固定。取L 。一。相应脊髓节段,后固 定2h ,用0 1m o l LP B 配制梯度蔗糖溶液内直至 标本沉底( 4 ) 。用O C T 包埋剂包埋,冰冻切片机 切片,片厚1 5 弘m ,干透后保存于一2 0 冰箱中备 用。 1 4 免疫组织化学染色 免疫组织化学染色均采用漂浮法。一抗为单克 隆鼠抗G S 抗体( 1 :5 0 0 ,S i g m a ) ,4 摇床上孵育 2 4h ,二抗为生物素化马抗鼠( 1 :2 0 0 ,北京中衫金 桥生物技术有限公司) ,3 7 摇床孵育2h ,三抗为 生物素一卵白素一辣根过氧化酶复合物( A B C 液1 : 2 0 0 ,北京中衫金桥生物技
15、术有限公司,用前3 0r n i n 配 制) 3 7 摇床孵育1h ,每次孵育后均用o 0 1n D l L P B S ( p H 7 4 ) 充分洗涤。D | A B 显色( 0 0 5 的n 蟠+ 0 0 1 的H z O z ,避光) 3 5m i n 镜下控制染色深 度。常规脱水、透明封片,M o t i c 显微镜观察、照相。 1 5 数据收集和分析 每个标本随机取5 张L 。一。脊髓切片,M o t i c 显 微镜( 德国M o t i c 公司) 下每张切片随机取5 个高倍 视野( 2 0 0 ) ,摄片后用M o t i c3 2 图像分析软件测 量脊髓后角内G S 免疫
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