弓形虫SAG1单基因疫苗与SAG1ROP2复合基因疫苗的免疫效果观察.pdf
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1、文章编号: 1 0 0 2 - 2 6 9 4 (2 0 0 5) 0 5 - 0 4 1 0 - 0 4 弓形虫S A G 1单基因疫苗与S A G 1 - R O P 2复合基因 疫苗的免疫效果观察* 杨婷婷, 何深一*, 张加勤, 周怀瑜, 丛华, 古钦民, 李瑛, 赵群力 摘要: 目的构建弓形虫主要表面抗原S A G 1单价基因疫苗及其与棒状体蛋白R O P 2的复合基因疫苗, 接种B A L B c 小鼠, 观察疫苗的免疫保护性。方法构建重组质粒p c D N A 3 . 1 - S A G 1及p c D N A 3 . 1 - S A G 1 - R O P 2。将两核酸疫苗分别
2、免疫小 鼠,E L I S A法检测血清I g G抗体、 I F N - 、I L - 4; 流式细胞仪测定T细胞亚群; 弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。 结果获得p c D N A 3 . 1 - S A G 1、 p c D N A 3 . 1 - S A G 1 - R O P 2重组质粒;p c D N A 3 . 1 - S A G 1 - R O P 2组小鼠I g G抗体 (P 0 . 0 5)(图3) 。 2 . 4 血清细胞因子测定按试剂盒提供的I F N - 标准品所测O D值绘制标准曲线, 将所测得的小鼠 血清O D值换算成I F N - 浓度 (p gm l)
3、 , 结果显示 p c D N A 3 . 1组、p c D N A 3 . 1 - S A G 1组、p c D N A 3 . 1 - S A G 1 - R O P 2组均能诱导T细胞分泌I F N - , 与同期 P B S组相比均有统计学意义 (P 0 . 0 5)(图4) 。 图4小鼠接受感染后生存曲线 F i g . 4 S u r v i v a l c u r v e so fB A L BcL i c ec h a l l e n g e dw i t h1 0 5 t a c h y z o i t e f o r L s o fR HT.g o n d i is t r
4、 a i n 4w e e k s a f t e r t h e t h i r d i n j e c t i o n 3 讨论 研究表明针对生活史某阶段的单价基因疫苗往 往不能提供对其他阶段弓形虫感染的保护性。虽然 S A G 1抗原具有较强的免疫原性和免疫保护性, 可 刺激机体产生I g G、 I g M、I g A抗体以及细胞因子 I F N - 6 等杀死虫体, 但弓形虫S A G 1蛋白是速殖子 期特异性蛋白, 动物实验表明S A G 1单价基因疫苗 只能使实验动物产生部分保护性 2 。R O P 2在弓形 虫生活史的三个阶段均有表达, 具有高度的保守性 和免疫原性, 但是, 含
5、R O P 2编码片断的D N A疫苗 却未能在敏感小鼠诱导出保护性 7 - 8 ; 另一研究 9 表明, 低剂量 (2 5 g 鼠) 的S A G 1与R O P 2混合基因 疫苗即能使小鼠抵御R H株弓形虫致死性攻击感 染, 而S A G 1或R O P 2单 基 因 低 (2 5 g 鼠) 、 高 (5 0 g 鼠) 剂量组小鼠均在8天内死亡, 表明S A G 1 与R O P 2基因联用确能增强D N A疫苗的免疫效果。 本实验首次将S A G 1与R O P 2基因顺序连接于 p c D N A 3 . 1真核表达载体上构建了弓形虫复合基因 疫苗, 并通过动物实验验证了该疫苗较之S
6、A G 1单 基因疫苗的免疫效果。弓形虫感染免疫中C D 8 +T 细胞的细胞毒作用以及T h l型细胞因子I F N - 的作 用占重要地位。后者可以活化巨噬细胞产生T N F - , 诱生N O效应并消耗速殖子赖以存活的细胞内色 氨酸而杀灭速殖子。而D N A免疫的一个主要优势 即在于可通过胞内合成抗原经MH C - I类途径提呈 激活C D+ 8T细胞, 并且质粒D N A中的C p G基序可 引发T h l型的细胞免疫应答, 产生包括I F N - 、 I L - 1 2在内的多种促炎因子。 我们的试验结果显示S A G 1及S A G 1 - R O P 2免 疫能诱导分泌高水平的I
7、 F N - 以及特异性I g G, 而 T h 2型细胞因子I L - 4则未检测到, 这与其它几项研 究的结果相符 7 - 9 ; 空质粒免疫也可诱生I F N - ; 同 时, 免疫组动物C D+ 4C D + 8 比值降低。证明接种 S A G 1或S A G 1 - R O P 2基因疫苗可以模拟弓形虫感 染, 激活机体C D+ 8T细胞以及T h 1型细胞免疫; 分 泌的特异性抗虫抗体也能发挥抗感染免疫作用。复 合基因免疫组的各项指标均优于单基因免疫组。本 实验接受攻击的小鼠均未能存活, 可能与鼠系以及 载体的选择有关 2 , 同时, 实验攻击量 (1 0 5 鼠) 远远 高于自然
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