溶栓素样品精纯方法的研究.pdf
《溶栓素样品精纯方法的研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《溶栓素样品精纯方法的研究.pdf(2页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、4 参考文献 1 Behague I,Poiriwe O,Nicaud V,et al . Beta fibrinogen gene polymor- phisms are associated with plasma fibrinogen and coronary artery disease in patients with myocardial infarction. The ECTIM study Etude Cas Te- moins surl infarctus du MyocardeJ . Circulation, 1996; 93: 440-9. 2 Tybjaerg HA,A
2、gerholm LB,Humphries SE,et al . A common mutation in the -fibrionogen promoter is an independent predictor of plasma fi- brinogen,but not of ischemic heart disease . A study of 9127 individuals based on the Copenhagen city heart study J . J Clin Invest,1997; 99: 3034-9. 3 Carter AM, Catto AJ, Bamfor
3、d JM,et al . Gender specific association of the fibrinogen b-448 polymorphism fibrinogen levels and acute cerebro- vascular disease J . Art Throm Vasc Biol, 1997; 17: 589-94. 4 Thomas AE, Green R, Kellher CH,et al . Variation in the promoter re- gion of the -fibrinogen gene is associated with plasma
4、 fibrinogen levels in smokers and non-smoker J . Thromb Haemost, 1991; 65: 487. 5 Humphries SE,Shu Y,Talmud P,et al . European Atherosclerosis Re- search Study:genotype at the fibrinogen locus (g455a beta gene )is as- sociated with differences in plasma fibrinogen levels in young men and women from
5、different regions in EuropeJ . Ar Throm Vasc Bio, 1995; 15: 96-104. 6 Iso H,Folsom AR,Winkelmann JC,et al . Polymorphisms of the fi- brinogen gene and plasma fibrinogen concentration in Caucasian and Jap- anese population samples J. Thromb Haemost, 1995; 73: 106-11. 7 Green F,Hamsten A,Biomback M,et
6、 al . The role of beta fibrinogen genotype in determing plasma fibrinogen levels in young survivors of myo- cardial infarction and healthy controls from Sweden J . Thromb Haem- ost, 1993; 70: 915-20. 2005-09-22 收稿 2005-10-27 修回 (编辑 张 慧) 溶栓素样品精纯方法的研究 王 昭 李 奇 迟秀梅 洪 敏 (吉林大学基础医学院生物化学教研室, 吉林 长春 130021) 摘
7、 要 目的 建立一种合适的纯化方法, 以利于进一步研究溶栓素的结构分析和酶化学性质。方法 利用电泳技术提纯, 用 S2251 作为底 物验证纯化前后样品的活性变化, 用高效液相色谱 (HPLC) 技术检验纯化效果。结果 纯化前后样品活性无变化, 纯度得到进一步提高。结论 这 是一种切实可行的纯化方法, 解决了普通实验室样品需要高度纯化的难题。 关键词 溶栓素; S2251; 高效液相色谱 中图分类号 R-331 文献标识码 A 文章编号 1005-9202 (2005) 12-1502-02 基金项目: 吉林省计委资助课题 (20050251) 通讯作者: 洪 敏 (1945-) , 男, 教
8、授, 博士生导师, 主要研究蛋白质工程 和生物制药。 作者简介: 王 昭 (1972-) , 男, 在读博士, 工作于佳木斯大学基础医学 院生物化学教研室, 主要研究蛋白质工程和生物制药。 溶栓素样品纯度已达到了卫生部规定的新药申报要求。 但欲分析该酶的组成、 结构以及其酶化学性质都需要将样品进 一步纯化。本文试图建立一种合适的溶栓素纯化方法。 1 材料与方法 1. 1 材料 溶栓素样品 (本教研室提供) ; 三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 、 丙烯酰胺、 甘氨酸 (Sigma 公司) ; 乙腈、 三氟乙酸 (TFA) (天地公司) ; N, N, N, N-四甲基乙二胺 (TEMED)(Me
9、rk 公司) ; S2251 (Fluka 公司) ; EDTA、N, N-甲叉双丙烯酰胺、 过硫酸铵等 均为国产分析纯。 1. 2 方法 1. 2. 1 溶栓素样品纯化 聚丙烯酰胺凝胶电泳 1, 2:灌制3 mm 厚的 5%聚丙烯酰胺凝胶, 插单孔梳子, 凝固后取下梳子, 在电泳槽中加入 8. 9%Tris-甘氨酸缓冲液, 以 15 mA 预电泳 15 min。用上样缓冲液 400 l 溶解约 4. 06 mg 样品, 在梳孔中均 匀上样。在 3 下以 30 mA 恒流电泳, 待样品进入凝胶后, 改 为 60 mA 恒流电泳。待溴酚蓝电泳至凝胶前端边缘时关闭电 泳, 取出凝胶。将凝胶左右两侧
10、各切下约 1. 5 cm, 用考马斯亮 兰 G-250 在 40条件下快速染色。待染出条带后, 将两条染色 后的凝胶在原凝胶位置上对齐, 确定溶栓素位置, 并将未染色 的凝胶上的含有溶栓素的条带切下, 备用。将余下的凝胶进行 染色、 脱色以确定切取的条带上溶栓素是否纯净。转移电 泳: 将透析袋分别用 50% 乙醇和 10 mmol/ L NaHCO3各浸泡 2 次, 每次约 1 h, 再用 EDTA 处理。最后用三蒸水冲洗干净, 备 用。将透析袋注满 8. 9% Tris-甘氨酸缓冲液, 用药匙将含有溶 栓素的凝胶条带装入透析袋。将凝胶固定在透析袋的中间位 置, 留下适量的缓冲液, 并尽量赶走
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 溶栓素 样品 精纯 方法 研究
链接地址:https://www.31doc.com/p-3712670.html