氯霉素药物分析方法的研究 毕业论文.doc
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1、摘要在p为10.6711.58的条件下, 氯霉素与茜素红反应生成玫瑰红色离子缔合物,最大显色波长位于474nm,线性范围为0.310.8 mg/L,摩尔吸光系数为1.11104L/(molcm),氯霉素在一定的浓度范围内遵从朗伯-比尔定律,由此建立了测定氯霉素的分光光度法,并探讨了适宜的反应条件、主要分析化学性质及络合比,最后进行了氯霉素的样品分析及加标回收实验。该法用于市售药物中氯霉素含量的测定,结果令人满意。关键词:氯霉素茜素红分光光度法乙醇 AbstractThe pH of 10.6711.58conditions, the generation of chloramphenicol
2、and alizarin red roses red-association complex, the largest color wavelength at 474 nm, the range of 0.3 10.8 mg / L, molar absorption coefficient : 1.11 104L / (mol cm), the concentration of chloramphenicol in a certain area to comply with Lambert - Beers law, which established the determination of
3、 chloramphenicol spectrophotometry, and to explore its optimum conditions, the main chemical analysis Nature and complex than the end of a sample analysis of chloramphenicol and the standard addition of recovery; the law for commercial drug chloramphenicol in the determination of satisfactory result
4、s.Key words:Chloramphenicol, alizarin red, spectrophotometry, ethanol1 引 言氯霉素(Chloramp henicol ,CAP) 为白色针状或微带黄绿色的针状、长片状结晶或结晶性粉末, 味苦, 易溶于甲醇、乙醇、丙酮, 微溶于水, 干燥时稳定, 其2.5% 水溶液的酸碱度为4.57.5,在弱酸性和中性溶液中较稳定, 煮沸不分解, 遇碱类物质失效, 熔点为149153 。其结构式为(图1): 图1氯霉素的结构式它是第一个化学人工合成的抗生素, 是一种有效的广谱抗生素,能抑制细菌蛋白质的合成,但对革兰氏阴性菌较强。对各种立克氏
5、体、原虫及部分病毒也有一定的抑制作用。由于价廉及其优良的抗菌性、稳定的药性,曾在一段时间内作为饲料添加剂和细菌性疾病的治疗用药,特别是在水产品中。但氯霉素存在严重的毒副作用,易引起人体血中毒, 能抑制人体骨髓造血功能,导致不可逆的再生障碍性贫血、引起粒状白细胞缺乏症,新生儿、早产儿灰色综合症等疾病,低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性,。长期微量摄入氯霉素不仅使沙门氏菌、大肠杆菌产生耐药性, 而且还会引起机体正常菌群失调, 使人类易患各种疾病。另外氯霉素还可引起视神经炎、视力障碍、多发性神经炎、神经性耳聋以及严重失眠。氯霉素在动物体内的残留, 通过肉、蛋、奶等传递给人类, 对人体危害极大。动
6、物食品中氯霉素残留对人类健康构成的潜在危害已被越来越多的人认识。因此,我国已禁止在渔牧养殖中使用氯霉素,并加强了对动物源性食品中氯霉素残留的检测力度。美国仅允许氯霉素用于非食用动物, 规定在动物食品中不得检出氯霉素。欧共体不允许氯霉素用于产奶母牛和产蛋鸡, 在其他动物的使用上也有限制, 并严格规定肉中的氯霉素残留量不得超过0.1ug/Kg。为了保障人民的健康及扩大食品的贸易往来, 建立灵敏度高, 特异性强, 简便易行的动物性食品中氯霉素残留的检测方法是非常必要的。目前对氯霉素的分析方法主要有以下几种:气相色谱法1-3、液相色谱法4-6、薄层色谱法7、放射性分析法8-9、微生物法10及免疫学检测
7、法11-12等。德国Russel 首先报道了液相色谱法检测氯霉素的残留,Arnold 和Somogyl 建立了放射免疫分析试验方法, Camphell 等建立了酶联免疫吸附测定法11-14。另外还有人采用单克隆抗体竞争性酶联免疫法测定猪肌肉组织中氯霉素残留, 检测限为25ugmL。更灵敏的亲合素-生物素酶联免疫吸附测定法也已成功建立,检测限达10ug/kg。目前已有测定氯霉素的试剂盒, 如EM IT 试剂盒,Lacar-Test试剂盒。本实验利用易于普及的紫外-可见分光光度计,采用茜素红可见分光光度法测定氯霉素的含量。研究发现,在pH 11.41的条件下,氯霉素与茜素红反应生成具有正吸收的玫瑰
8、红色络合物,最大正吸收波长位于474nm,线性范围为0.310.8 mg/L,氯霉素在一定的浓度范围内,遵从朗伯-比尔定律,因此建立了测定氯霉素的光度分析法,并探讨了适宜的反应条件、主要分析化学性质及络合比。该法用于市售药物中氯霉素含量的测定,效果良好。2 实验部分 2.1 仪器和试剂 UV-3010型紫外-可见近红外分光光度计(天美公司,香港);T6新世纪型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);Seveneasy型实验室酸度计(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。氯霉素(Chloramp henicol,CAP;长江师范学院分析测试中心提供)标准溶液:储备液浓度1.010-3
9、mol/L,操作液浓度1.010-4mol/L。茜素红(alizarin red,ALR;四川隆昌化学试剂厂)的水溶液:1.010-3mol/L,1.010-4mol/L。BR缓冲溶液:0.4mol/L H3PO4、H3BO3和HAc与0.2 mol/LNaOH溶液按一定比例混合,用Seveneasy型实验室酸度计检测配成一系列不同pH值的缓冲溶液。HAc-NaAc缓冲溶液:0.2 mol/L NaAc溶液与0.2 mol/LHAc溶液按一定比例混合,用Seveneasy型实验室酸度计检测配成一系列不同pH值的缓冲溶液。Tris-HCl缓冲溶液:0.2 mol/L Tris溶液与0.2 mol
10、/L HCl溶液按一定比例混合,用Seveneasy型实验室酸度计检测配成一系列不同pH 值的缓冲溶液。表面活性剂:溴化四乙基钠(TBAB)0.5g/L;溴代十六烷基吡啶(TPB)0.5g/L;十二烷基磺酸钠(SDS)10g/L;十二烷基苯磺酸钠 8g/L;溴化四乙基铵(TEAB)1.5g/L;乳化剂(OP)1%;SLS 0.5g/L;溴代十六烷基三甲基钠(TMAB) 0.5g/L。氯霉素为生化试剂,其余试剂均为分析纯,实验用水为超纯水。2.2 实验方法 在10 mL比色管中,准确加入0.5 mL pH 11.41的BR缓冲溶液,再依次准确加入2.0mL 1.010-3mol/L茜素红溶液和一
11、定量的1.010-4mol/L 氯霉素标准溶液,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,15min后,以试剂空白为参比,在474nm处以1cm液池测其吸光度。3 结果与讨论3.1 吸收光谱按实验方法配制溶液后,于UV-3010型紫外-可见分光光度计上扫描吸收光谱(图2、图3)。图2表明,氯霉素在可见光区几乎无吸收(曲线1),茜素红在可见光区产生强烈吸收,最大吸收波长为530nm(曲线2,)当在茜素红溶液中加入氯霉素溶液时(pH 11.41),二者发生显色反应生成玫瑰红色络合物(曲线3),最大吸收波长为474nm,红移56nm。氯霉素在一定浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系(图3)。可见显色法可用于氯霉素含
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