第十章 维生素测定.ppt
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1、第一节 维生素C的测定 第二节 维生素B的测定 第三节 脂溶性维生素的测定,第十章 维生素测定,概述,维生素是维持人体正常生命活动所必需,大部分对维持人体健康和促进发育至关重要。缺乏会导致相应疾病。 测定食品维生素含量的意义: 评价食品营养价值; 指导食品加工工艺; 指导人们膳食结构。 分类:水溶性B、C ,脂溶性A、D、E、K。 检测方法:化学法、仪器法、生物法。,第一节 Vc测定,Vc(抗坏血酸) 主要有还原型和脱氢型两种形式; 还原型抗坏血酸氧化生成脱氢型抗坏血酸,进一步水解生成2,3-二酮古乐糖酸,失去生理活性。 常用测定方法: 2, 6-二氯靛酚法(还原型) 简便、灵敏,但特异性差、
2、易受干扰、深色样液不易判断; 2, 4-二硝基苯肼法(总VC,还原型+脱氢型) 操作复杂、特异性差、易受干扰; 荧光法(总VC) 准确度高、重现性好、干扰少,但操作复杂; HPLC法 准确度高、重现性好、干扰少、灵敏、简便、快速。,(1)2,6-二氯靛酚法 原理 还原型抗坏血酸还原染料2,6-二氯靛酚(红色),生成脱氢抗坏血酸,染料变为无色。无杂质干扰时,被还原的2,6-二氯靛酚的量与样品中所含抗坏血酸的量成正比。 试剂 草酸溶液、维生素C标准液(需标定)、2,6-二氯靛酚溶液(需标定); 用于标定Vc标准溶液:淀粉溶液、KI溶液、KIO3溶液。 操作方法 提取:称样加草酸溶液捣浆定容过滤样液
3、 滴定:样液快速用2,6-二氯靛酚溶液滴定至粉红色15秒内不消失,注意事项 滴定时,可同时吸二个样品,一个滴定,另一个作为观察颜色变化的参考; 样品进入实验室后,应浸泡在2%草酸液中,防止氧化; 整个操作过程中要迅速,避免还原型抗坏血酸被氧化;若样品含有低价金属离子(Fe2+、 Cu2+)或还原性杂质,会还原2,6-二氯靛酚,使测定值增高; 若样液颜色较深,可用白陶土脱色; 需做空白对照,样液滴定体积扣除空白体积。,(2)2, 4-二硝基苯肼法,v原理 用活性炭把还原型的抗坏血酸催化脱氢生成脱氢型抗坏血酸,然后与2,4-二硝基苯肼作用生成红色的脎。在浓硫酸作用下生成橘红色的双-2,4-二硝基苯
4、,最大吸收波长520nm,可比色测定。 v操作步骤 样品提取活性炭氧化加2,4-二硝基苯肼保温反应加浓硫酸静置比色。 v注意事项 活性炭的氧化作用机理; 硫脲的作用(保护抗坏血酸)。,第二节 Vb测定 (1)维生素B1的测定荧光计法 原理 维生素B1(硫胺素)在碱性铁氰化钾溶液中,被氧化成硫色素,在紫外光下产生蓝色荧光,荧光强度与维生素B1含量成正比。 操作方法P280 盐酸水解淀粉酶水解离子交换柱净化加碱性铁氰化钾氧化比色测定 注意事项 为何要用酸和酶水解?(水解结合型硫胺素),第二节 Vb测定 (2)维生素B2的测定荧光法 分为核黄素荧光法和光黄素荧光法。 核黄素荧光法P282-类似VB1
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