2019-2020学年人教版生物选修一讲义:专题2 课题3 分解纤维素的微生物的分离 Word版含答案.pdf
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1、课题课题 3 分解纤维素的微生物的分离 分解纤维素的微生物的分离 学习目标:学习目标:1.了解纤维素与纤维素酶。 了解纤维素与纤维素酶。 2.理解纤维素分解菌的筛选原理。理解纤维素分解菌的筛选原理。 (重点重点) 3.简述从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法。简述从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法。 1纤维素与纤维素酶纤维素与纤维素酶 (1)纤维素纤维素 元素组成:元素组成:C、H、O 三种元素。三种元素。 组成单体:葡萄糖。组成单体:葡萄糖。 种类:除天然纤维素外,还有水溶性的羧甲基纤维素钠、不溶于水的微晶种类:除天然纤维素外,还有水溶性的羧甲基纤维素钠、不溶于水的微晶 纤维素等。纤维
2、素等。 (2)纤维素酶纤维素酶 组成:纤维素酶是一种复合酶,包括组成:纤维素酶是一种复合酶,包括 C1酶、酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分。酶和葡萄糖苷酶三种组分。 作用作用 纤维素纤维二糖葡萄糖纤维素纤维二糖葡萄糖 C C1 1酶 酶、 、C X X酶 酶 葡葡萄萄糖糖苷苷酶酶 2纤维素分解菌的筛选纤维素分解菌的筛选 (1)方法方法 刚刚果果红红 染染色色法法 方方法法一一: :先先培培养养微微生生物物,再再加加入入刚刚果果红红进进行行颜颜色色反反应应 方方法法二二: :在在倒倒平平板板时时就就加加入入刚刚果果红红) (2)原理:原理: 以纤维素分解菌以纤维素分解菌 3实验设计和课题延伸实验设
3、计和课题延伸 (1)实验设计实验设计 土壤取样:选择纤维素丰富的环境土壤取样:选择纤维素丰富的环境 选择培养 : 通过选择培养来增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从样品中分 离到所需要的菌株 选择培养 : 通过选择培养来增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从样品中分 离到所需要的菌株 梯度稀释:目的是使菌体分离梯度稀释:目的是使菌体分离 涂布培养:将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上涂布培养:将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选菌株:挑选产生透明圈的菌落挑选菌株:挑选产生透明圈的菌落 (2)课题延伸课题延伸 为确定透明圈内的菌落是否是纤维素分解菌,需要进行发酵产纤维素酶的为确定透明圈内
4、的菌落是否是纤维素分解菌,需要进行发酵产纤维素酶的 实验,纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。实验,纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。 纤维素酶的测定方法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡纤维素酶的测定方法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡 萄糖进行定量的测定。萄糖进行定量的测定。 1判断对错判断对错 (1)纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵。纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵。( ) (2)对分解纤维素的微生物进行了初步筛选后,无需再进行其他实验。对分解纤维素的微生物进行了初步筛选后,无需再进行其他实验。( ) (3)纤维素酶的测定方法,一般
5、是对所产生的葡萄糖进行定量的测定。纤维素酶的测定方法,一般是对所产生的葡萄糖进行定量的测定。( ) (4)纤维素酶是一种复合酶。纤维素酶是一种复合酶。( ) 提示:提示:(1) (2) 初步筛选只是分离纯化的第一步,为确定得到的是纤维素分解菌,还 需要进行发酵产生纤维素酶的实验。 初步筛选只是分离纯化的第一步,为确定得到的是纤维素分解菌,还 需要进行发酵产生纤维素酶的实验。 (3) (4) 2在加入刚果红的培养基中出现透明圈的菌落是在加入刚果红的培养基中出现透明圈的菌落是( ) A分解尿素的细菌分解尿素的细菌B硝化细菌硝化细菌 C分解纤维素的细菌分解纤维素的细菌D乳酸菌乳酸菌 C 分解纤维素的
6、细菌能将纤维素分解,刚果红分解纤维素的细菌能将纤维素分解,刚果红纤维素的复合物就无法形 成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。 纤维素的复合物就无法形 成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。 3筛选出纤维素分解菌后还需要用下列哪项实验来确定筛选出纤维素分解菌后还需要用下列哪项实验来确定( ) A发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶B发酵产纤维素发酵产纤维素 C纤维素酶分解滤纸纤维素酶分解滤纸D纤维素分解产生葡萄糖纤维素分解产生葡萄糖 A 为确定得到的透明圈中的菌落是否是纤维素分解菌,需要进行发酵产纤 维素酶的实验,纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。 为确定得到的透明圈中的
7、菌落是否是纤维素分解菌,需要进行发酵产纤 维素酶的实验,纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。 纤维素酶及纤维素分解菌的筛选纤维素酶及纤维素分解菌的筛选 合作交流合作交流 1草食性动物是怎样消化食物中的纤维素的?草食性动物是怎样消化食物中的纤维素的? 提示:提示:反刍动物的瘤胃中生活着大量的可以分解纤维素的微生物。微生物能 够产生纤维素酶,最终将纤维素分解成葡萄糖。 反刍动物的瘤胃中生活着大量的可以分解纤维素的微生物。微生物能 够产生纤维素酶,最终将纤维素分解成葡萄糖。 2培养基中出现透明圈一定是纤维素分解菌的作用吗?培养基中出现透明圈一定是纤维素分解菌的作用吗? 提示:提示:不一定。刚
8、果红与多糖类化合物产生红色复合物,若多糖为淀粉,产 生淀粉酶的微生物也可使培养基产生透明圈。 不一定。刚果红与多糖类化合物产生红色复合物,若多糖为淀粉,产 生淀粉酶的微生物也可使培养基产生透明圈。 归 归纳纳总总结 结 1纤维素酶纤维素酶 (1)纤维素酶的组成及作用:纤维素酶的组成及作用: (2)纤维素酶作用的实验验证纤维素酶作用的实验验证 试管试管12 滤纸条滤纸条1 cm6 cm1 cm6 cm 缓冲液缓冲液(pH4.8)10 mL11 mL 纤维素酶纤维素酶(7080 u/mL)1 mL 条件条件 将试管固定在将试管固定在 50 mL 的锥形瓶中,在摇床上以的锥形瓶中,在摇床上以 140
9、 r/min 的转速振荡反应的转速振荡反应 1 h 结果结果滤纸条被完全分解滤纸条被完全分解滤纸条基本无变化滤纸条基本无变化 2.纤维素分解菌的筛选纤维素分解菌的筛选刚果红染色法刚果红染色法 (1)原理:原理: 纤维素分解菌纤维素分解菌 产生产生 Error! 形形成成 红红色色 复复合合物物 纤纤维维素素酶酶 红红色色消消失失、 、出出现现透透明明圈圈,根根 据据是是否否产产生生透透明明圈圈来来筛筛选选) (2)染色方法:染色方法: 方法一:培养基经涂布培养长出菌落覆盖质量浓度为方法一:培养基经涂布培养长出菌落覆盖质量浓度为 1 mg/mL 的的 CR 溶液 倒 去 溶液 倒 去 CR 溶
10、液 加 入 物 质 的 量 浓 度 为溶 液 加 入 物 质 的 量 浓 度 为 1 mol/L 的的 NaCl 溶 液溶 液 1 10 015 min后后 倒掉倒掉 NaCl 溶液出现透明圈。溶液出现透明圈。 1 15 5 m mi in n后后 方法二:配制质量浓度为方法二:配制质量浓度为 10 mg/mL 的的 CR 溶液灭菌按照每溶液灭菌按照每 200 mL 培养 基加入 培养 基加入 1 mL 的比例加入的比例加入 CR 溶液混匀倒平板接种后培养出现透明圈。溶液混匀倒平板接种后培养出现透明圈。 (3)两种刚果红染色法的比较:两种刚果红染色法的比较: 方法一方法一方法二方法二 区别区别
11、 先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反 应 先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反 应 倒平板时就加入刚果红倒平板时就加入刚果红 优点优点 显示出的颜色反应基本上是纤维素分解 菌的作用 显示出的颜色反应基本上是纤维素分解 菌的作用 操作简便, 不存在菌落混杂 问题 操作简便, 不存在菌落混杂 问题 缺点缺点 操作繁琐,加入刚果红溶液会使菌落之间 发生混杂 操作繁琐,加入刚果红溶液会使菌落之间 发生混杂 容易出现假阳性反应容易出现假阳性反应 特别提醒:特别提醒:在倒平板时就加入刚果红容易出现假阳性反应的原因在倒平板时就加入刚果红容易出现假阳性反应的原因 (1)由于在纤维素粉、琼脂和土豆汁中都含有淀
12、粉类物质,可以使能够产生淀 粉酶的微生物出现假阳性反应。 由于在纤维素粉、琼脂和土豆汁中都含有淀粉类物质,可以使能够产生淀 粉酶的微生物出现假阳性反应。 (2)有些微生物具有降解色素的能力,长时间培养会降解刚果红,从而形成明 显的透明圈,这些微生物与纤维素分解菌不易区分。 有些微生物具有降解色素的能力,长时间培养会降解刚果红,从而形成明 显的透明圈,这些微生物与纤维素分解菌不易区分。 典题通关典题通关 下列关于分离纤维素分解菌的实验的叙述,错误的是下列关于分离纤维素分解菌的实验的叙述,错误的是( ) A经选择培养后将样品直接涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上经选择培养后将样品直接涂布到鉴别纤维素
13、分解菌的培养基上 B选择培养这一步可省略,但培养出的纤维素分解菌少选择培养这一步可省略,但培养出的纤维素分解菌少 C可先在固体培养基上培养微生物,再用刚果红溶液染色可先在固体培养基上培养微生物,再用刚果红溶液染色 D 鉴别纤维素分解菌的原理是纤维素分解后的产物不能和染料形成红色复合 物 鉴别纤维素分解菌的原理是纤维素分解后的产物不能和染料形成红色复合 物 A 经选择培养后需要进行梯度稀释后方可涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上, 经选择培养后需要进行梯度稀释后方可涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上,A 错误;选择培养这一步可以省略,但培养出的纤维素分解菌少,错误;选择培养这一步可以省略,但培养
14、出的纤维素分解菌少,B 正确; 常用的刚果红染色法有两种:一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应, 另一种是在倒平板时就加入刚果红, 正确; 常用的刚果红染色法有两种:一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应, 另一种是在倒平板时就加入刚果红,C 正确;鉴别纤维素分解菌的原理是纤维素 分解后的产物不能和刚果红形成红色复合物, 正确;鉴别纤维素分解菌的原理是纤维素 分解后的产物不能和刚果红形成红色复合物,D 正确。正确。 1下列关于纤维素的叙述中,不正确的是下列关于纤维素的叙述中,不正确的是( ) A纤维素是由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物纤维素是由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物
15、B纤维素能被土壤中某些微生物分解利用,是因为这些微生物能够产生纤维 素酶 纤维素能被土壤中某些微生物分解利用,是因为这些微生物能够产生纤维 素酶 C植物的根、茎、叶等器官中都含有大量的纤维素植物的根、茎、叶等器官中都含有大量的纤维素 D 自然界中的各种生物均能把纤维素分解成葡萄糖, 从而作为生物体的能量 来源 自然界中的各种生物均能把纤维素分解成葡萄糖, 从而作为生物体的能量 来源 D 自然界中许多生物都不能分解纤维素。故选自然界中许多生物都不能分解纤维素。故选 D。 2纤维素分解菌的筛选原理是纤维素分解菌的筛选原理是( ) A刚果红可以与纤维素形成红色复合物刚果红可以与纤维素形成红色复合物
16、B刚果红可以与纤维二糖和葡萄糖形成红色复合物刚果红可以与纤维二糖和葡萄糖形成红色复合物 C刚果红可以与纤维素酶形成红色复合物刚果红可以与纤维素酶形成红色复合物 D刚果红可以与纤维素分解菌结合形成红色复合物刚果红可以与纤维素分解菌结合形成红色复合物 A 刚果红是一种染料, 它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物, 但并不和纤维素水解后产生的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,刚果红也不与纤 维素酶或者与纤维素分解菌结合形成红色复合物。故正确答案为 刚果红是一种染料, 它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物, 但并不和纤维素水解后产生的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,刚果红也不与纤 维素酶或者
17、与纤维素分解菌结合形成红色复合物。故正确答案为 A。 分离纤维素分解菌的实验设计与 分析 分离纤维素分解菌的实验设计与 分析 合作交流合作交流 1为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌?为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌? 提示:提示:由于生物与环境的相互依存关系,在富含纤维素的环境中,纤维素分 解菌的含量相对较高, 因此从这种环境中获得目的微生物的概率要高于普通环境。 由于生物与环境的相互依存关系,在富含纤维素的环境中,纤维素分 解菌的含量相对较高, 因此从这种环境中获得目的微生物的概率要高于普通环境。 2在纤维素分解菌的筛选过程中涉及的生物技术有哪些?在纤维素分解菌的筛选过
18、程中涉及的生物技术有哪些? 提示:提示:主要用到培养基的配制、无菌操作技术、稀释涂布平板法、选择培养 基的作用和土壤取样等。 主要用到培养基的配制、无菌操作技术、稀释涂布平板法、选择培养 基的作用和土壤取样等。 归 归纳纳总总结 结 1实验流程实验流程 2选择培养的操作步骤选择培养的操作步骤 3纤维素分解菌的筛选与鉴别所用的培养基的比较纤维素分解菌的筛选与鉴别所用的培养基的比较 (1)纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基,利用液体培养基能使营养成分 充分消耗,以增加纤维素分解菌的浓度。纤维素分解菌的鉴别培养基为固体培养 纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基,利用液体培养基能使营养成分 充分消耗
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