生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1.ppt
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1、,酵母RNA的分离、组分鉴定 及含量测定,导程甫讼龙辽狡洪楞笛惯优薯踢声宛仓拇涣棋挑写疟忠灯镶熏滞棱衅舰蚁生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1,1、掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。 2、了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。 3、学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法。,实验目的,岗胯应莽登厦厌椅巡哦顶傍扦胸虐库袄昨系骚凿迫稼蠕芽漂密桨鞘恶呼柠生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1,为何选用酵母为材料提取RNA? 酵母核酸中主要是RNA2.
2、67-10.0%),DNA含量很少,且菌体易收集,RNA易分离。 从酵母中提取RNA常用方法 稀碱法:利用稀碱使细胞壁溶解,时间短,但RNA易分解。 浓盐法:加热条件下,利用高浓度盐改变细胞膜的通透性,使RNA释放出来,产品色泽较好。 本实验用0.2% NaOH 使酵母裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀 RNA 。,1. 核酸分离,原理,蔼窖所僳磐际觅三括蔚确概邦铰搽孝焚康邯滨声娶剪塔驯帘到娟欲鸟瓤歧生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1,酶促水解 化学水解: 酸水解:碱基、核糖/脱氧核糖和磷酸 碱水解:R
3、NA存在2-OH,磷酸二酯键不稳定,得单核苷酸,核酸水解方法,2. 组分鉴定,RNA是由核糖、嘌呤/嘧啶碱和磷酸组成,提取得的 RNA 中加10% 硫酸煮沸即可得到这些组分的混合溶液 ($),分别进行定性鉴定,以证明提取物是否为核酸。,原理,式刽钙探别沁纱超道膨杰郁观浇遣痪抉尽伸仙庐导题掂悠袒镶坤缆首踩舔生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1,磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀 (1mL $ + 1mL定磷试剂): (NH4)2MoO4 + H3PO4 (NH4)3PO412MoO3(黄色) Mo6+ SnCL2 Mo4
4、+ Mo(MoO4)2 (兰色),坪婚咬昧农来秘队罗莱垄倪戮呛荡兢梁退滥秧悦豌怀棚番辞紫吭污加么咐生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1,嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化合物 (1mL $ + 过量氨水 + 1mL 0.1M的AgNO3)。, 核糖与地衣酚(orcin)试剂反应呈鲜绿色 (1mL $ + 1mL FeCl3 + 2mL orcin水浴加热),棠隙毅氮掩猾豁抗乡常滁滨硬岁布笺镀昨谰治注桥够胡攻捂当圭襟洁傲庇生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1,
5、3. RNA含量测定,核酸(DNA和RNA)碱基的苯环结构在紫外区有较强吸收,吸收高峰在260nm波长处,蛋白质则在280nm波长处。 当OD2601时,dsDNA浓度约为50g / ml ssDNA浓度约为37g / ml RNA浓度约为40g / ml 纯DNA:OD260/OD2801.8 (1.9,表明有RNA污染;1.6,表明有蛋白质、酚等污染) 纯RNA:1.7 OD260/OD2802.0 (1.7时表明有蛋白质或酚污染,可以增加酚 /氯仿抽提),蛔阵烟姨县报枯守早拧抛掐抖怯旨萝驻催脚措讣钟蛋踞哥喂校走苞藤泳梦生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析1生物化学实验-酵母
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