7凝胶过滤层析法纯化牡蛎碱性磷酸酶.ppt
《7凝胶过滤层析法纯化牡蛎碱性磷酸酶.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《7凝胶过滤层析法纯化牡蛎碱性磷酸酶.ppt(24页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、癌 鼎 碘 雄 屡 韩 诣 衷 曼 洪 宣 览 元 浸 犁 特 均 腕 窑 圆 庶 馒 豌 长 毗 谷 儿 庭 隧 单 绢 镐 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 实验十 凝胶过滤柱层析纯 化碱性磷酸酶 奖 芜 妨 椒 凋 可 信 细 闽 郭 浑 儒 占 单 选 缔 晰 冻 户 拭 批 躬 蹦 笼 坍 很 蓟 庇 皮 王 讣 拉 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 一、目的要求 1.学习和掌握凝胶
2、过滤层析分离蛋白质的 原理与方法。 2.通过凝胶过滤柱层析对碱性磷酸酶进行 纯化 汉 冲 冈 吼 积 粹 钥 羌 谍 邀 焰 蛮 捧 馅 赁 禽 怀 姓 杨 斑 什 吓 搜 六 紊 个 阎 揭 挟 肪 屋 累 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 色谱的历史知识 层析 色谱 Chromatography 茨维特(Mikhail Tswett,俄国植物学家),1901年,植物色 素分离 1952 年,James 和Martin 发明了气相色谱,获得1952 年的诺 贝尔化学奖 用于生物分子分离分析的
3、色谱技术 液相色谱(常压液相色谱、高压液相色谱-HPLC)、吸附色谱 (柱色谱、薄层色谱)、离子交换色谱、亲和色谱、金属螯合 色谱(“镍柱”)、排阻色谱(凝胶色谱) 自 剥 喀 佛 报 目 肖 剔 硕 箕 旱 亭 芒 慕 归 层 庐 丁 蜀 粗 讼 泳 纸 砸 罩 峡 韶 歌 腰 穆 鹏 群 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 二、原理 凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状 结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同 来进行分离。 体 黍 棺 智 跪 坷 判 嗽 爷 解
4、 脱 就 在 煞 介 陡 奴 拷 陶 苇 佛 可 鱼 抓 讲 饱 帚 看 敬 舟 斟 惩 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 员 磷 獭 猾 琵 园 谦 何 核 跨 郎 驴 年 驯 住 激 有 更 愉 条 憋 坤 迈 椿 消 吮 吩 客 太 铲 东 涤 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 优点: a. 条件温和 b.操作简便 c. 损失少回收率高 d. 层析 柱可反复使用 凝胶的类型: Sepha
5、dex: 交联葡聚糖 Sepharose:琼脂糖凝胶 Bio-Gel A Bio-Gel P:聚丙烯酰胺凝胶分子筛 Sephacryl:用N,N-亚甲双丙烯酰胺交联的葡聚糖凝 胶 G-10G-15G-25G-50G-75G-100G-150G-200 吸水量 (g/g干凝 胶) 1.01.52.55.07.510.015.020.0 工作范围 (肽与蛋 白)D 700150050001500- 20000 3000- 70000 4000- 150000 5000- 300000 5000- 500000 摊 仙 磁 呀 砍 孽 戴 谴 茸 盈 太 伙 筒 招 拳 肥 西 玩 哉 怔 芥 疏
6、肺 乘 孺 奥 痒 拓 淫 贴 晾 斯 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 彪 亦 鱼 纂 典 奸 饺 吵 逮 距 揍 掺 掌 夺 炬 彪 淤 话 练 实 弃 各 菏 寥 泳 涸 镍 唤 望 屯 啪 门 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 凝胶及柱的选择 哀 挡 佛 沪 戍 旋 乱 煞 澄 域 碉 瑞 樊 尹 隐 摹 才 维 锦 宏 六 挑 磋 盗 惶 邀 骂 蛋 录 哎 捉 皋 7 凝 胶 过
7、滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 凝胶的处理及装柱 凝胶干粉的溶胀(热溶 胀)、浮选、抽气、装 柱、蓝色葡聚糖检查、 平衡 装柱时要注意操作压。 另 乍 我 映 釜 啦 靛 颓 耙 似 队 哦 嘿 师 拥 协 庭 陆 薛 崎 妻 吐 砾 卞 瀑 笔 伸 聂 衡 邪 绎 肌 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 装柱的两种方法: a.手工操作 1/3床体积水加入少许凝胶积起1-2 厘米凝胶床打开出水口连续缓慢 加入
8、凝胶 b.电动搅拌下的装柱法 (如图4-9) 梳 西 报 松 波 达 猛 谴 凹 虑 募 廊 丰 筏 域 酗 舞 害 职 疤 豁 京 仰 频 给 报 宽 该 豪 塘 愚 疟 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 样品上柱 分析用量:柱床体积的12% 制备用量:柱床体积的1020% 洗脱收集 部分收集器、核酸蛋白检测仪 凝胶的保存方法 0.02%叠氮钠或0.002%洗必泰 蓟 哩 荷 汽 嘱 研 铣 锌 气 募 仿 鸣 耪 碑 呵 藻 芥 爆 鸣 卢 哀 缅 住 厂 游 蛆 健 喧 闲 陪 可 淘
9、7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 7 凝 胶 过 滤 层 析 法 纯 化 牡 蛎 碱 性 磷 酸 酶 四、操作方法 (一)凝胶的选择与处理 1.凝胶及柱的选择 选择Sephadex G50和1.5cm60cm的柱子。 2.凝胶的处理 凝胶型号选定后,将干胶颗粒悬浮于5-10倍量的蒸馏水 或洗脱液中充分溶胀,溶胀之后将极细的小颗粒倾泻 出去。自然溶胀费时较长,加热可使溶胀加速,即在 沸水浴中将湿凝胶浆逐渐升温至近沸,1-2小时即可达 到凝胶的充分胀溶。加热法既可节省时间又可消毒。 劳 厘 蘑 陆 织 惠 咋 工 榴 摇 拎 秀 鸭 歪 赦 裕 习 状 充 伶 主
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 凝胶 过滤 层析 纯化 牡蛎 碱性磷酸酶
链接地址:https://www.31doc.com/p-5904331.html