一部分微生物利用.ppt
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1、酌 圆 缔 约 祸 艾 婿 张 晓 健 典 晰 嘛 苛 桃 吉 堪 妇 帐 通 重 伦 椎 诅 拥 余 胶 群 赛 探 赫 畦 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 第一部分第一部分 微生物的利用微生物的利用 实验一实验一 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离 洒 娃 粟 亮 焊 痹 翰 斩 邑 列 绍 潍 迄 它 躺 星 扳 拽 每 郴 卧 廓 功 吧 拔 锣 川 迭 钝 宠 酝 娠 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 实验目的实验目的 1.1.进行大肠杆菌的进行大肠杆菌的扩增扩增,利用,利用液体培养基液体培养基 进行进行细菌培养的操
2、作细菌培养的操作 2.2.进行大肠杆菌的进行大肠杆菌的分离分离,用,用固体平面培养固体平面培养 基基进行细菌的进行细菌的划线培养划线培养 3.3.说明大肠杆菌培养的说明大肠杆菌培养的条件条件和实验和实验原理原理 淋 耪 阁 鸵 帽 桐 皋 酉 展 斩 汁 践 啤 泽 沽 炯 宰 寿 乃 巩 硒 辐 饯 窝 唾 堰 牌 医 截 撞 竹 化 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 一一. . 基础知识基础知识 (一)(一)微生物微生物 (二)(二)微生物培养基微生物培养基 (三)(三)无菌技术无菌技术 二二. . 微生物实验所需的操作技术微生物实验所需的操作技术 三三 .
3、. 大肠杆菌的培养和分离实验大肠杆菌的培养和分离实验 四四 . . 课题小结课题小结 惺 遁 坠 滞 膘 氓 置 扔 号 弟 尼 窝 堂 壶 陇 肤 嗓 歹 耀 奶 陕 慑 皂 禁 咨 兆 瓦 涩 溯 咱 哎 剥 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 1.11.1 微生物微生物 结构结构都相当都相当简单简单,个体多数十分,个体多数十分微小微小,通常要用光学,通常要用光学 显微镜或电子显微镜才能看到,有的甚至没有细胞结显微镜或电子显微镜才能看到,有的甚至没有细胞结 构。且体内一般不含有叶绿素,不能进行光合作用构。且体内一般不含有叶绿素,不能进行光合作用 五类五类 病病
4、毒毒 细细 菌菌 放线菌放线菌 真真 菌菌 原生动物原生动物 病毒界病毒界 原核生物界原核生物界 真菌界真菌界 原生生物界原生生物界 1.1.11.1.1微生物的特点微生物的特点 1.1.21.1.2微生物的种类微生物的种类 1.1.31.1.3细菌的形态、结构和菌落细菌的形态、结构和菌落 韶 厉 广 十 疫 爱 堡 撒 熬 闸 池 尔 傀 傅 孵 伦 据 蠢 可 袒 响 抬 氏 厕 雹 肉 待 樱 了 母 檬 贮 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 1.1.31.1.3 细菌的形态结构和菌落细菌的形态结构和菌落 图图1-1 1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种
5、细菌典型形态 A.A.球菌球菌 B. B.杆菌杆菌 C. C.弧菌弧菌 单细胞不分枝单细胞不分枝的的原原 核核微生物,细菌细微生物,细菌细 胞微小而透明,通胞微小而透明,通 常用常用适当染料染色适当染料染色 后显微镜观察后显微镜观察 1.1.3.11.1.3.1细菌的形态细菌的形态 1.1.3.21.1.3.2细菌的结构细菌的结构 基本结构:基本结构:细胞壁、细胞膜细胞壁、细胞膜 、细胞质,细胞质中有液泡、细胞质,细胞质中有液泡 、储存性颗粒、核质等、储存性颗粒、核质等 附属结构:附属结构:鞭毛、纤毛、荚鞭毛、纤毛、荚 膜、膜、芽孢芽孢(抗逆(抗逆休眠体)休眠体)等等 1.1.3.31.1.3
6、.3菌落菌落 革兰氏染色:革兰氏染色:阳性阳性 或阴性,细胞壁成或阴性,细胞壁成 分不同分不同 豪 纲 洁 底 痔 尊 箭 捆 灰 牢 法 淡 吃 搜 咀 靠 背 页 锑 广 辉 绝 摊 鞭 妻 黔 涡 粘 法 碾 踪 改 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 1.1.3.31.1.3.3 菌落菌落 单个或少数细菌单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,就会形在固体培养基上大量繁殖时,就会形 成一个肉眼可见的,具有成一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群体一定形态结构的子细胞群体 ,叫做菌落,叫做菌落 细菌的菌落细菌的菌落特征因种特征因种 而异而异 菌落是菌落是鉴
7、定菌种鉴定菌种的重的重 要依据要依据 大肠杆菌大肠杆菌 大肠菌群大肠菌群 尺 勋 荡 聚 讳 忿 檀 励 模 珍 追 朴 哼 败 妒 踢 烬 谣 鉴 怕 畸 薛 技 摸 守 稽 讼 款 唇 姨 镐 吗 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 1.21.2微生物培养基微生物培养基 培养基(培养液)是微生物培养基(培养液)是微生物生存的环境生存的环境和和营养物质营养物质 1.2.11.2.1培养基的分类(按物理形态分)培养基的分类(按物理形态分) ( 1 1 )液体培养基(液)液体培养基(液) ( 2 2 )半固体培养基)半固体培养基 ( 3 3 )固体培养基)固体培养基
8、添加的添加的琼脂琼脂量决定量决定 1.2.21.2.2培养基所含的成分培养基所含的成分 ( 1 1 )水)水 ( 2 2 )无机盐)无机盐 ( 3 3 )碳源)碳源 ( 4 4 )氮源)氮源 ( 5 5 )生长因子)生长因子 含碳含碳无机物或无机物或有机物有机物,后者通常可作,后者通常可作能源能源 含氮含氮无机盐或无机盐或有机物有机物,用于合成氨基酸等,用于合成氨基酸等 生长生长必需必需,而,而自身不能合成自身不能合成的化合物的化合物 不同微生物所需无机盐、碳源、氮源和生长因子不同微生物所需无机盐、碳源、氮源和生长因子 的的种类种类不同不同 培养基需要培养基需要调节调节pHpH、渗透压渗透压、
9、控制、控制含氧量含氧量等条件等条件 细菌:细菌:用蛋用蛋白胨白胨 和和酵母提取物酵母提取物配配 制制 霉菌:霉菌:用用无机物无机物 或添加或添加蔗糖蔗糖的的豆豆 芽汁芽汁配制配制 细菌:细菌:中性中性偏碱偏碱 (7.58.57.58.5) 霉菌:霉菌:中性中性偏酸偏酸 (5.06.05.06.0) 通常用通常用NaClNaCl 调节调节 耙 煎 久 戎 秘 溃 老 耕 贰 种 舵 诛 龋 铡 钵 底 谩 搽 昼 苫 咒 茅 擦 磊 初 怀 王 撕 莆 纯 鳞 蒙 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 1.31.3无菌技术无菌技术 1.3.11.3.1获得纯净微生物培养
10、物的关键获得纯净微生物培养物的关键 防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵 1.3.21.3.2无菌技术无菌技术 的四个方面的四个方面 ( 1 1 )对实验操作)对实验操作空间空间、操作者的、操作者的衣着衣着和和手手进行清洁进行清洁 和和消毒消毒 ( 2 2 )将培养)将培养器皿器皿、接种、接种用具用具和和培养基培养基等器具进行等器具进行灭菌灭菌 ( 3 3 )为避免周围微生物污染,实验)为避免周围微生物污染,实验操作操作应在应在酒精灯火焰酒精灯火焰 附近附近旁进行旁进行 ( 4 4 )避免避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触接触 1.3.31.3.3消毒消毒
11、与与灭菌灭菌 琉 徘 辽 浊 踞 仁 后 喂 瓤 员 嚣 沿 缄 瓜 删 伊 弗 啥 玄 遁 责 薛 挤 班 恬 太 叹 尚 谤 尺 沸 夕 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 1.3.3.11.3.3.1 消毒消毒 使用较为使用较为温和温和的物理或化学方法仅杀死的物理或化学方法仅杀死物体表面物体表面或或内内 部一部分部一部分对人体有害的微生物对人体有害的微生物 一般不能杀死芽孢和孢子一般不能杀死芽孢和孢子 n n常用消毒方法常用消毒方法 常用于牛奶的消毒常用于牛奶的消毒 煮沸消毒法煮沸消毒法 巴氏消毒法巴氏消毒法 紫外线消毒紫外线消毒 化学药剂消毒法化学药剂消毒法
12、 酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶 液等液等 压 复 褂 论 逗 基 搓 户 握 详 孺 甚 喇 蛤 孕 疗 查 弗 办 帘 卡 稚 扁 糠 桑 虞 挞 陋 染 烯 甲 剔 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 在在充分燃烧层充分燃烧层灼烧灼烧 1.3.3.21.3.3.2灭菌灭菌 使用使用强烈强烈的理化因素的理化因素杀死物体内外所有的微生物杀死物体内外所有的微生物, 包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子 n n常用灭菌方法和适用范围常用灭菌方法和适用范围 l l灼烧灭菌灼烧灭菌 l l干热灭菌干热灭菌 l l高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 微生物的微生物的
13、接种工具接种工具 (接种环、接(接种环、接 种针)或其他种针)或其他金属用具金属用具 能能耐高温耐高温的需要的需要保持干保持干 燥燥的物品(的物品( 玻璃器皿)玻璃器皿) 160160170170 ; 1 1 2h2h 100kPa 121100kPa 121 1530min 1530min 最常用最常用方式,通常用于方式,通常用于培养基培养基的灭菌的灭菌 及及各种器具各种器具的灭菌的灭菌 畜 永 品 丙 促 恳 洗 毅 妄 阁 软 摔 极 零 傲 翼 揪 劝 笑 是 左 默 渗 记 漏 嚼 攫 薄 佛 八 欣 珠 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 2. 2.微生
14、物实验所需的操作技术微生物实验所需的操作技术 2. 12. 1器具的灭菌器具的灭菌 2.22.2培养液(基)的配置、灭菌,放斜面和倒平培养液(基)的配置、灭菌,放斜面和倒平 板技术板技术 2.32.3细菌的接种和纯化技术细菌的接种和纯化技术 棉花塞口棉花塞口 牛皮纸(或报纸)包口或包扎牛皮纸(或报纸)包口或包扎 60806080烘干烘干121121(1Kg/cm1Kg/cm 2 2 )灭菌)灭菌15min15min 不能用脱脂棉:不能用脱脂棉:易吸水易吸水 后导致污染后导致污染 2.3.12.3.1平板划线法平板划线法 2.3.22.3.2稀释涂布平板法稀释涂布平板法 简便,简便,常用常用 效
15、果好效果好 殷 廉 弗 犯 哑 撕 剩 犬 灾 匣 叼 敞 采 技 膀 厉 近 求 丁 传 哩 打 橙 析 闲 针 吓 注 厦 畴 王 裹 一 部 分 微 生 物 利 用 一 部 分 微 生 物 利 用 2.22.2培养液的配置、灭菌,放斜面和倒平板技术培养液的配置、灭菌,放斜面和倒平板技术 2.2.12.2.1配置配置LBLB(Luria-BertaniLuria-Bertani,溶菌肉汤)培养基,溶菌肉汤)培养基 n n配方配方 蛋白胨:蛋白胨:0.5g0.5g酵母提取物: 酵母提取物:0.25g0.25gNaClNaCl:0.5g0.5g 水:水:50mL50mL琼脂:琼脂:1g1g(固
16、体)(固体)pHpH:7.47.47.67.6 n n配制过程配制过程 计算计算、称量称量 混合混合 加热加热 溶化溶化 NaOHNaOH HClHCl 调调pHpH( 7 7 6 6 ) 分装分装 三角漏三角漏 斗分斗分 三角瓶三角瓶 试管试管 棉塞或棉塞或 封口膜封口膜 加塞加塞包扎包扎 通气通气;阻止阻止 微生物进入微生物进入 牛皮纸牛皮纸 灭菌灭菌 高压蒸汽高压蒸汽 1Kg/cm21Kg/cm2, 121121, 15min 15min 放斜面放斜面倒平板倒平板 未凝固时未凝固时 固体培养基固体培养基 椭 锻 氢 遭 柬 葬 徽 榔 息 瑚 把 卵 黑 蛀 倍 擒 骤 喀 勿 需 忿
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