罗丹明B快速检测胶体金.doc
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1、附件3食品中罗丹明B的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201703)1范围本方法规定了食品中罗丹明B的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于辣椒粉和辣椒酱中罗丹明B的快速测定。2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中罗丹明B经有机试剂提取,固相萃取小柱净化,浓缩复溶后,罗丹明B与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制了抗体和检测卡中检测线(T线)上抗原的结合,从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线(C线)颜色深浅比较,对样品中罗丹明B进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1正己烷。3.1.2丙酮。3.1.
2、3甲醇。3.1.4磷酸氢二钠。3.1.5磷酸二氢钠。3.1.6提取试剂:将正己烷与丙酮按照体积比80:20混匀。3.1.7复溶液:称取35.61g磷酸氢二钠(3.1.4)置于1000ml容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,制成0.2mol/L溶液A;称取31.21g磷酸二氢钠(3.1.5)置于1000ml容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,制成0.2mol/L溶液B。将溶液A与溶液B按照体积比67:33混匀,制成pH7.1磷酸盐缓冲液。3.2参考物质罗丹明B参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度98.6%表1 罗丹明B参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式
3、、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量罗丹明BRhodamineB81-88-9C28H31C1N2O3479.01注:或等同可溯源物质。3.3标准溶液配制3.3.1罗丹明B标准储备液(1mg/mL):精密称取适量罗丹明B参考物质(3.2),置于10mL容量瓶中,用甲醇(3.1.3)溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为1mg/mL的罗丹明B标准储备液。冷藏,有效期6个月。3.3.2罗丹明B标准中间液A(1g/mL):精密量取罗丹明B标准储备液(1mg/mL)(3.3.1)0.1mL,置于100mL容量瓶中,用甲醇(3.1.3)稀释至刻度,摇匀,制成1g/mL的罗丹明B标准中间液
4、A。临用新制。3.3.3罗丹明B标准中间液B(100ng/mL):精密量取罗丹明B中间液A(1g/mL)(3.3.2)1mL,置于10mL容量瓶中,用甲醇(3.1.3)稀释至刻度,摇匀,制成100ng/mL的罗丹明B标准中间液B。临用新制。3.4材料3.4.1固相萃取小柱:中性氧化铝柱,1000mg/6ml。3.4.2免疫胶体金试剂盒(在28、干燥、避光条件下保存,在产品有效期内使用)。3.4.2.1金标微孔。3.4.2.2试纸条或检测卡。4仪器和设备4.1移液器:200L、1mL和10mL。4.2涡旋混合器。4.3离心机:转速4000r/min。4.4电子天平:感量为0.01g。4.5振荡器
5、。4.6样品浓缩仪:如有需要。4.7环境条件:温度:1525,相对湿度60%。5分析步骤5.1试样制备取具有代表性样品约500g,充分粉碎混匀,均分成两份,分别装入洁净容器作为试样和留样,密封,标记,于常温保存。5.2试样提取和净化准确称取试样2g(精确至0.01g)置于50mL具塞离心管中,依次加入20mL提取剂(3.1.6),振荡提取3min,以5000r/min离心5min。上清液待净化。吸取5mL提取剂(3.1.6)于固相萃取小柱(3.4.1)中,流出液弃去。将上清液全部转移至固相萃取小柱中,流出液弃去。再加入20mL提取剂(3.1.6)淋洗固相萃取小柱,流出液弃去。用5mL甲醇洗脱小
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