DNA的粗提取与鉴定(修改版).ppt
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1、DNA的粗提取与鉴定,目的要求 知道DNA提取原理 据原理设计DNA提取方法 能对DNA进行鉴定 掌握本实验的基本操作方法,一、实验原理,1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。,2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度,是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14 molL的氯化钠溶液中的溶解度最低,利用这一原理,可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。,3.DNA不溶于酒精溶液,但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。,4.DNA遇二苯胺(沸水浴)会变成蓝色,因此,二苯胺可以作为
2、鉴定DNA的试剂。,5.注意事项:最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液,实验材料和用具,实验材料: 1、新鲜鸡血细胞液(510ml); 2、体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24h); 3、蒸馏水; 4、质量浓度为0g/ml的柠檬酸钠溶液(抗凝剂) ; 5、物质的量浓度分别为2mol/L和0015mol/L的NaCl溶液; 6、二苯胺试剂。,实验用具: 铁架台;铁环;镊子;三角架;酒精灯;石棉网;载玻片;玻璃棒;滤纸;滴管;量筒(100ml,一个);烧杯;(100ml,一个,50ml、500ml各二个);试管(20ml,二个);漏斗;试管夹;纱布。,二、方法与过程,1.制鸡血
3、细胞液(活鸡鲜血经分离或沉淀获得),500mL烧杯中,玻棒搅拌,离心、分离或静置沉淀。,2.提取DNA。,取血细胞5-10mL20mL蒸馏水,用玻棒沿一个方向快速搅拌。,两层纱布过滤:滤液中含DNA和其他核物质,如蛋白质。,原理:血细胞的细胞膜、核膜吸水涨破,玻璃棒快速搅拌,机械加速血细胞破裂。,.提取血细胞核物质:,.溶解核内的DNA:,滤液2mol/L的NaCl溶液40mL,玻棒沿一个方向轻缓搅拌。,不要碰底!,用吸管吸走上清液,抗凝剂,DNA含量高,防止DNA破碎,防止DNA破碎,溶解DNA效果好,取滤液,涨破,.析出含DNA的粘稠物:,.滤取含DNA的粘稠物:,. DNA粘稠物的再溶解
4、:,在上述溶液中缓缓加入蒸馏水,并沿一个方向轻轻搅拌,出现白色丝状物;当丝状物不再增加时,停止加水(此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L)。,用多层纱布过滤,含DNA的粘稠物留在纱布上。,在20mL烧杯中一个方向轻缓搅拌3min,使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。,.过滤含有DNA的NaCl溶液:,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤所得的溶液,滤液中含有DNA。,取滤渣(析出物),取滤液,含杂质的DNA,.提取含有杂质较少的DNA:,步骤所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL,用玻棒沿一个方向轻缓搅拌,溶液中析出乳白色丝状物,用玻棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。,3.DN
5、A的鉴定:,加入0.015mol/L的NaCl溶液5mL和二苯胺试剂4mL,用玻棒搅拌使DNA溶解,沸水浴5min,待冷却后观察溶液是否出现蓝色。,1.共有“三次过滤,两次析出,七次搅拌”,2.加入“两次蒸馏水,三次NaCl溶液,一次酒精”,三、实验小结,析出DNA效果好,DNA细小易碎,反应条件,溶解DNA,防止血凝固,使血细胞涨破,溶解DNA,使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得 DNA最大限度地析出,使含DNA的黏稠物被留在纱布上,使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中,除去含DNA的滤液中的杂质,析出DNA, A出现蓝色 B无变化,2.实验中NaCl的物质的量浓度
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