免疫组化的染色操作的质控管理.docx
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1、免疫组化的染色操作的质控管理免疫组化染色是一项综合性的操作技术,其影响因素复杂,加强质量管理和提高可信性尤为重要。我科从 2001 年开展免疫组化染色,在具体的操作过程中进行了精细而有效的全程质控,现将质控事项综述如下。1、 标本固定固定液为 4%中性缓冲甲醛( 10 ml 甲醛 +90 ml PBS 缓冲液) 。要求离体后及时固定,固定液的量为标本体积的5 10 倍。固定不当,固定时间不够或过长,都可引起抗原丢失,尤其是一些较脆弱的膜抗原( 如 CD20 等) ,故固定应及时并充分。取材后小标本固定时间应 6 h,肿瘤标本最好 24 h。对于淋巴结、根治标本应及时切开固定。2、 切片、烤片、
2、脱蜡免疫组化染色要求切片薄而完整。一般切片厚度为3 4 μm,淋巴组织可切2 μm。切片应平整,因为切片褶皱、边缘卷曲可造成试剂难以冲洗干净,这在手工染色时尤为重要。否则显色时这些区域就有可能出现背景着色,影响整张切片的染色质量。清洁时要求展片用水和容器均保证干净,避免污染,干扰阅片。烤片温度不宜过高,65 70烤片 1 2 h即可。烤片时间短易造成脱片,温度高或过长易导致抗原丢失。脱蜡不彻底,蜡膜会阻碍抗体渗入从而阻止抗体与抗原的结合。我科采用三级松节油脱蜡,每级 10 15 min,并且每 200 张切片更换第一缸松节油,保证脱蜡彻底。用松节油脱蜡的染色效果与二甲苯脱蜡基本一致
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