醋酸薄膜电泳【古柏高教】.ppt
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1、,实验三 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳,(Cellulose acetate membrane electrophoresis of serum proteins),1,教育材料,1、掌握电泳法分离蛋白质的原理 2、熟悉醋酸纤维素薄膜电泳的操作、注意事项 3、熟悉测定血清中各种蛋白质相对百分含量 的方法 4、了解AG的临床意义,实验目的,2,教育材料,分离蛋白质的方法,3,教育材料,电泳,依据分子或颗粒所带电荷、形状、大小等不同,因而在电场介质中移动速度不同,从而达到分离的技术。,一、电泳,4,教育材料,阴离子,向正极移动,阳离子,向负极移动,5,教育材料,电泳速度:带电粒子在电场中运动时,单
2、位电场强度内粒子运动的速度,以u表示,即,V粒子运动的速度 X电场强度 Q粒子所带电荷 r粒子的半径 介质的粘度,6,教育材料,二、电泳的影响因素,分离样品的性质 电泳介质的pH 缓冲液的离子强度 电场强度 电渗作用,7,教育材料,电渗作用,在电场中液体对固体支持物的相对移动.,如果样品原本是移向负极的,则泳动的速度加快; 如果样品原本是移向正极的,则泳动的速度减慢。,8,教育材料,三、电泳的分类,支持介质不同,纸电泳(Paper electrophorisis),醋酸纤维薄膜电泳(Cellulose Acetate electrophoresis),琼脂凝胶电泳(Agar Gel elect
3、rophoresis),聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE),9,教育材料,支持介质装置形式不同:, 平板式电泳 ; 垂直板式电泳 ; 垂直柱式电泳,pH 的连续性不同: 连续pH 电泳 非连续pH 电泳,10,教育材料,血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳,Cellulose acetate membrane electrophoresis of serum proteins,11,教育材料,本实验以醋酸纤维膜为电泳支持物,分离各种血清蛋白。 醋酸纤维膜是由醋酸纤维加工制成的一种细密且薄的微孔膜。广泛应用于医学临床中各种生物分子的分离分析中。,实验原理,12,教育材
4、料,醋酸纤维素较纸电泳的优点,电渗作用影响小 醋酸纤维素膜对蛋白的吸附小,几乎无“拖尾”。 由于醋酸纤维素亲水性小,所容纳的缓冲液也较少,电流大部分是由样品传导,所以分离速度快。,醋酸纤维素是纤维素(纸)的醋酸酯,13,教育材料,血清蛋白质,清蛋白和球蛋白,清蛋白和1、2、-球蛋白,电泳,14,教育材料,血清蛋白的等电点pI大多在7.5以下,在pH为8.6的巴比妥缓冲液中以负离子形式存在,并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点及形状也有差异,在电场中迁移速率不同,可以在醋酸纤维素薄膜上分离成清蛋白、1球蛋白、2球蛋白、球蛋白、r球蛋白五个区带 。,预测电泳谱是什么样?,15,教育材料,血清蛋白电
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